[发明专利]检测人ST2蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种用于定量检测待测物中人ST2蛋白的荧光免疫层析试纸，该试纸通过双抗体夹心法检测所述人ST2蛋白，其中：

所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一ST2单克隆抗体作为捕获抗体，所述第一ST2单克隆抗体来源于人ST2抗原表位肽(1)和(2)中的一者；并且

所述双抗体夹心法采用第二ST2单克隆抗体作为检测抗体，所述第二ST2单克隆抗体来源于人ST2抗原表位肽(1)和(2)中的另一者；

所述人ST2抗原表位肽(1)和(2)分别为：

(1)Gly-Lys-Asn-Ala-Asn-Leu-Thr-Gln-Gln-Glu-Glu-Gly-Gln-Asn-Gln-Ser-Tyr；

(2)Tyr-Lys-Asp-Glu-Thr-Arg-Val-Arg-Leu-Ser-Arg-Lys-Asn-Pro-Ser-Lys-Glu。

2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述第一ST2单克隆抗体是由第一ST2抗原制备而成的，该第一ST2抗原是通过使所述人ST2抗原表位肽(1)和(2)中的一者与载体蛋白偶联制备而成的；并且

所述第二ST2单克隆抗体是由第二ST2抗原制备而成的，该第二ST2抗原是通过使所述人ST2抗原表位肽(1)和(2)中的另一者与载体蛋白偶联制备而成的。

3.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微球的粒径为320nm至400nm。

4.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微球上的荧光物质为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明或X-罗丹明；所述荧光微球的微球材料为聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或由甲基丙烯酸甲酯与其它单体共聚形成的共聚物。

5.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微球的激发波长为350～600nm；发射波长为500～700nm。

6.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述试纸具有底板，并且在该底板上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置有：样品垫、结合垫、反应膜、吸水滤纸，所述结合垫设置有所述的标记有荧光微球的第一ST2单克隆抗体，所述反应膜包括检测区和质控区，所述检测区包被有所述第二ST2单克隆抗体，所述质控区包被有能与所述的标记有荧光微球的第一ST2单克隆抗体特异性结合的抗抗体。

7.根据权利要求6所述的荧光免疫层析试纸，其中所述反应膜为在大于550nm的波长下基本上不发荧光的硝酸纤维素膜。

8.根据权利要求6所述的荧光免疫层析试纸，其中所述底板基本上不具有荧光性质。

9.一种制备根据权利要求1至8中任意一项所述的荧光免疫层析试纸的方法，其包括以下步骤：

1)提供标记有荧光微球的第一ST2单克隆抗体；

2)提供结合垫，其中在所述结合垫上包被所述的标记有荧光微球的第一ST2单克隆抗体；

3)提供反应膜，其中在所述反应膜上沿使用时的层析方向间隔固定第二ST2单克隆抗体和抗抗体，以分别形成检测区和质控区；和

4)在底板上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置样品垫、所述结合垫、所述反应膜、吸水滤纸，从而制成所述荧光免疫层析试纸。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述步骤1)包括：

a)用碳二亚胺活化荧光微球；

b)洗涤步骤a)所获得的活化的荧光微球；

c)用步骤b)所获得的荧光微球标记第一ST2单克隆抗体。

11.根据权利要求9所述的方法，其中在所述步骤2)中，所述的标记有荧光微球的第一ST2单克隆抗体的包被浓度为0.5～2ng/ml。

12.根据权利要求9所述的方法，其中在所述步骤3)中，所述第二ST2单克隆抗体和所述抗抗体的包被浓度分别为0.5～2ng/ml。