[发明专利]检测肽酰基精氨酸脱亚氨酶用生物传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种肽酰基精氨酸脱亚氨酶检测用生物传感器，其特征在于该传感器是在金电极表面上修饰一条多肽链1，在银纳米颗粒表面修饰多肽链2，通过葫芦脲[8]介导的超分子作用可以结合芳香族氨基酸，即葫芦脲[8]结合多肽链1和多肽链2 N末端的FGG，进而把两条多肽链连接在电极上；所述的多肽链1序列为FGGGRGAC；多肽链2序列为FGGGGC。

2.一种制备根据权利要求1所述的肽酰基精氨酸脱亚氨酶检测用生物传感器的方法，其特征在于该方法的具体步骤如下：将预处理过的金电极浸没在修饰电极的反应液中，4℃反应16-18h，即得到肽酰基精氨酸脱亚氨酶检测用生物传感器；每100μL所述的修饰反应液由50μL、10μM的多肽1、30μL、10mM的PBS和20μL、50mM的TCEP组成。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的金电极的预处理的方法为：将金电极用砂纸和含有颗粒大小为1.0μm、0.3μm和0.05μm的铝粉的麂皮上打磨和抛光之后，将电极分别在无水乙醇和超纯水中超声3min，然后用配置好的水虎鱼，即浓硫酸：过氧化氢=3:1的体积比的混合液，每根电极滴50μL，净化金电极，去除残留的杂质；最后经过0.5M的H₂SO₄活化。

4.一种肽酰基精氨酸脱亚氨酶的检测方法，采用三电极检测系统，其中饱和甘汞电极作为参比电极，铂丝作为对电极，工作电极采用根据权利要求1所述的肽酰基精氨酸脱亚氨酶检测用生物传感器，其特征在于该方法的具体步骤为：

a． 每50μL反应体系中含有50mM的Tris-HCl、10mM的CaCl₂、0.005nM～200nM的PAD4，pH=7.6，将金电极浸没在该反应体系中，在37℃恒温温育2 h；

b．把步骤a所得金电极浸没在200μL的10mg/ml的胰蛋白缓冲液溶液中，在37℃的条件下反应1 h；所述的胰蛋白酶的缓冲液配方为：50mM的Tris-HCl，20mM的CaCl₂，pH 8.4；

c．将步骤b所得的金电极浸没在5μM的葫芦脲8溶液中，室温反应1h；

d．将多肽链2修饰的银纳米颗粒在15000 r，4℃，离心20 min，去除未完全修饰上的多肽，再用修饰多肽的缓冲溶液复溶，将上述电极浸没在复溶液中，反应2.5 h；

e．通过三电极检测体系，采用线性扫描伏安法的电化学方法来表征银纳米颗粒的电化学信号的响应。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的多肽链2修饰银纳米颗粒的方法为：取1440uL的制备好的银纳米颗粒，加入60uL浓度为5uM多肽链2，在4℃的冰箱修饰16-18h。