[发明专利]一种谷胱甘肽还原酶测定试剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生化检测领域，具体的，涉及一种谷胱甘肽还原酶测定试剂测定试剂及其制备方法和应用。

背景技术

谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)是一种利用还原型NAD(P)将氧化型谷胱甘肽(GS－SG)催化反应成还原型(GSH)的酶。

在动植物组织、微生物、酵母中均可以见到，其反应是不可逆的。

鼠肝脏的酶几乎只能利用NADP作为补酶，但是在人的红血球的酶也利用NAD进行作用。对胱氨酸和高胱氨酸均无作用。可从酵母中制取结晶物。植物组织中似乎可对脱氢酶和氧化酶的连结起作用。将谷胱甘肽还原酶GS－SG、NADP和叶绿体混合一起用光照射，就会放氧，这就是受人重视的希尔(Hill)反应。大肠杆菌这种酶中含有黄素。

谷胱甘肽是一种重要的细胞抗氧化剂。缺失谷胱甘肽还原酶会使细胞对氧化剂和抗生素更为敏感。

传统的检测方法使用复溶液加干粉，试剂现溶现用，稳定性差，不适于全自动分析的要求，因此有必要开发一种新的具有良好稳定性和检测准确性的谷胱甘肽还原酶测定试剂。

发明内容

本发明的目的是在于克服传统的谷胱甘肽还原酶测定方法存在的稳定性差的缺陷，提供一种在2-8℃开盖使用状态下和在2-8℃密闭避光存储条件下持续稳定的谷胱甘肽还原酶测定试剂。

本发明的另一个目的是在于提供上述谷胱甘肽还原酶测定试剂的制备方法和在测定中的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种谷胱甘肽还原酶测定试剂，所述试剂包括试剂1和试剂2，所述试剂1的组成成分包括：缓冲液、氧化型谷胱甘肽、稳定剂A；试剂2的组成成分包括：缓冲液、还原型辅酶Ⅱ、稳定剂B；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、碳酸盐缓冲液中的任一种；所述稳定剂A为乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、山梨酸钾中的一种或两种以上的混合物；所述稳定剂B为蔗糖、抗坏血酸、牛血清白蛋白、山梨酸钾中的一种或两种以上的混合物。

其中：

所述试剂1中，氧化型谷胱甘肽的浓度为0.1-1mmol/L；缓冲液的终浓度为50-100mmol/L；稳定剂A的浓度为1-2g/L。

所述试剂2中，还原型辅酶Ⅱ的浓度为0.1-1g/L；缓冲液的终浓度为100-500mmol/L；稳定剂B的浓度为1-10g/L。

进一步的技术方案：

还包括校准品，所述校准品的组成成分包括基质、纯品及稳定剂C，所述基质为缓冲液、酪蛋白、牛血清白蛋白中的一种或两种以上的混合物，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、碳酸盐缓冲液中的任一种；所述纯品为谷胱甘肽还原酶；所述稳定剂C为海藻糖、抗坏血酸、乙二胺四乙酸二钠中的一种两种以上的混合物。

其中：

在所述校准品中纯品的浓度为30-100U/L；稳定剂C的浓度为1-10g/L；当所述基质中含有缓冲液时，缓冲液的浓度为50-100mmol/L；当所述基质中含有酪蛋白时，酪蛋白的浓度为1-10g/L；当所述基质中含有牛血清白蛋白时，牛血清白蛋白的浓度为1-10g/L。

更进一步的：

所述试剂1的pH为7.0-8.0，试剂2的pH为9.0-10.0。

所述校准品的pH为7.5-8.0。

一种谷胱甘肽还原酶测定试剂的制备方法，包括如下步骤：

a)试剂1的配制：试剂1的制备过程中各成分的混合顺序没有特别要求，在室温条件下，直接将所述缓冲液、氧化型谷胱甘肽、稳定剂A进行同时、分批或分步混合，只要能得到均匀的稳定相即可，通过搅拌使混合更加均匀；

b)试剂2的配制：试剂2的配制是在室温条件下，按照缓冲液、稳定剂B、还原型辅酶Ⅱ的顺序，依次混合，得到均匀的稳定相，通过搅拌使混合更加均匀；

c)校准品的配制：校准品的配制是在室温条件下，按照基质、稳定剂C、纯品的顺序，依次混合，得到均匀的稳定相，通过搅拌使混合更加均匀。