[发明专利]一种蛹虫草多孢杂交育种的方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及应用生物技术原理人工培育真菌的技术领域，具体涉及蛹虫草的培育，更具体地涉及一种蛹虫草多孢杂交育种的方法及其应用。

背景技术

蛹虫草（Cordyceps militaris）隶属于真菌界（Fungi）、子囊菌门（Ascomycota）、子囊菌纲（Ascomycetes）、粪壳菌亚纲（Sordariomycetidae）、肉座菌目（Hypocreales）、麦角菌科（Clavicipitaceae）、虫草属（Cordyceps）。蛹虫草是非常著名的药食两用的子囊真菌，也是获得虫草素的主要来源，具有很高的开发利用价值。近年来，随着野生冬虫夏草资源的日渐枯竭，其价格不断攀升，从而促使人们寻找野生冬虫夏草的替代品。由于蛹虫草具有与冬虫夏草相近的药用与食用价值，加之蛹虫草更容易驯化，因此受到人们越来越多的关注。

蛹虫草的生物活性成分主要是虫草素、虫草酸和多糖。虫草素是蛹虫草的次生代谢产物，为腺苷酸类似物，是从真菌中分离出的第一个核苷酸类抗菌素，具有抑制肿瘤、抗惊厥、抗焦虑等多种药用价值。

在相关技术中，通常都是以蛹虫草的菌种开始培养繁殖，进而得到虫草素、多糖和虫草酸。常见的蛹虫草菌种在培养过程中，首先制作固体试管种再将试管种转接到液体培养液中，震荡培养一定时间，得到液体母种，得到的液体母种经过扩培后或直接接种到子实体培养基继续培养。一般而言，蛹虫草菌种在培养生长过程中会用到固体培养基、液体培养基及子实体培养基；其中固体培养基包括：20%马铃薯，5%葡萄糖，3%琼脂粉；液体培养基包括：20%马铃薯，2%葡萄糖，0.2%蛋白胨，0.09%磷酸二氢钾，0.04%硫酸镁；子实体固体培养基包括：25%大米或麦子，2.0%蛋白胨，0.07%磷酸二氢钾，0.04%硫酸镁。

此外，一方面，蛹虫草就是一种退化特别快的菌种，如果培养基营养不全，就会导致产量低、退化快；另一方面，蛹虫草的生长是一个退化的过程，是人工难以控制的。

为此，需要探索一种培育优良蛹虫草菌种的方法，并为其生长提供营养全面的培养基，以期获得有活力且退化慢的菌种，进而培育得到产量高、有益成分含量丰富的子实体。

发明内容

本发明提供一种蛹虫草多孢杂交育种的方法，包括以下步骤：

1）将蛹虫草的孢子弹射至固体培养基上，培养得到蛹虫草的多孢菌种；

2）将所述多孢菌种转接到斜面培养基中，培养得到斜面菌种；

3）将所述斜面菌种转接到液体培养基上，摇床培养得到种子液。

通过本发明获得的蛹虫草多孢杂交菌种活力高、发菌快，可减少菌种的退化，进一步培养可获得高产、虫草素含量高的子实体。

进一步，步骤1）所述的固体培养基按照重量份数计，包括：马铃薯9-10份，葡萄糖0.9-1份，琼脂0.6-0.8份，水50-60份。

更进一步，步骤1）所述的固体培养基按照重量份数计，包括：马铃薯9.4份，葡萄糖0.95份，琼脂0.7份，水56份。

进一步，步骤2）所述的斜面培养基按照重量份数计，包括：马铃薯9-10份，葡萄糖0.9-1份，磷酸二氢钾0.09-0.1份，硫酸镁0.04-0.05份，琼脂0.8-1份，水50-60份。

更进一步，步骤2）所述的斜面培养基按照重量份数计，包括：马铃薯9.5份，葡萄糖0.93份，磷酸二氢钾0.093份，硫酸镁0.045份，琼脂0.82份，水56。

进一步，步骤3）所述的液体培养基按照重量份数计，包括：马铃薯9-10份，葡萄糖0.9-1份，蛋白胨0.4-0.5份，酵母浸粉0.4-0.5份，磷酸二氢钾0.09-0.1份，硫酸镁0.04-0.05份，脱脂蚕蛹粉0.09-0.1份，水50-60份，维生素B1 0.0009-0.02份。

更进一步，步骤3）所述的液体培养基按照重量份数计，包括：马铃薯9.5份，葡萄糖0.96份，蛋白胨0.43份，酵母浸粉0.43份，磷酸二氢钾0.093份，硫酸镁0.047份，脱脂蚕蛹粉0.094份，水54份，维生素B1 0.0112份。

进一步，所述培养基中的蛋白胨的总氮含量不低于13.5%，氨基酸含量不低于3%；所述培养基中的水为矿泉水或者蒸馏水，PH值为6-7。