[发明专利]一种切向流系统在硫酸铵梯度法制备脂质体中的应用方法

说明书

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体而言，涉及一种切向流系统在硫酸铵梯度法制备脂质体中的应用方法。

背景技术

在台湾东洋药品工业股份有限公司的授权发明专利“多柔比星脂质体及其制备方法和用途(专利号：ZL200410097044.7)”中，对脂质体的制备进行了较为详尽的描述。该发明专利中公开了采用硫酸铵梯度法制备脂质体，挤出后的样品通过切向流系统，采用中空纤维柱以5％～15％的蔗糖溶液对脂质体样品进行透析。

在石药集团中奇制药技术(石家庄)有限公司的在审专利“一种水溶性药物脂质体制备方法(公开号：CN103536533A)”中也指出，可采用超滤装置移去空白脂质体外的硫酸铵，置换成蔗糖溶液。

由此可见，超滤设备--切向流系统已被应用于脂质体工业化生产中，然而其具体操作，如透析液的选择和工艺条件却未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种切向流系统在硫酸铵梯度法制备脂质体中的应用方法，该方法能够快速除去脂质体混悬液中的小分子有机溶剂及外相硫酸铵，有效地造成内外相硫酸铵梯度，制备出高质量的空白脂质体，以实现高效的药物包载。

为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：

一种切向流系统在硫酸铵梯度法制备脂质体中的应用方法，包括以下步骤：

步骤1)采用硫酸铵梯度法制备脂质体混悬液；

先将磷脂溶于小分子醇中，预热后与预热好的硫酸铵溶液进行混合水化，将水化后的样品进行挤出，得到脂质体混悬液；

步骤2)采用切向流系统对脂质体混悬液进行透析；

(1)将切向流系统的流速调节至150～230mL/min；

(2)以硫酸铵作为第一透析液，消耗2～10倍样品重量的硫酸铵，以除去脂质体混悬液中的小分子有机物；

(3)再以等渗蔗糖溶液作为第二透析液，消耗2～10倍样品重量的蔗糖溶液，以除去外相硫酸铵。

进一步的，所述硫酸铵的物质的量为0.10～0.25M，pH为4.5～6.5；所述等渗蔗糖溶液的浓度为5～15％，pH为4.5～6.5。

优选的，所述硫酸铵的物质的量为0.25M，pH为5.5；所述等渗蔗糖溶液的浓度为10％，pH为5.5。

在选择透析溶液的时，应考虑到透析过程中透析液对脂质体的影响，即对如脂质体内相离子、分子的流失，其他离子、分子的进入，内相酸碱环境的变化，渗透压的变化，以及脂质体的稳定性的影响。基于离子、分子透过脂双层的能力以及脂双层的致密程度，对内相变化有了掌握。脂质体混悬液中，磷脂的溶剂如小分子醇类 (甲醇、乙醇)的存在，将导致脂质体致密性下降，增加内外相的交换频率及概率，增加了内相变化风险。离子透过脂双层膜的透过系数不同，(NH₄)₂SO₄＜SO₄^2-＜NH⁴⁺＜＜H⁺＜＜＜NH₃能迅速的从脂质体内相转移至外相，导致内相H⁺浓度升高，由于脂质体内相体积较小且无缓冲环境，H⁺浓度升高导致内相pH的显著变化。本专利就是利用此原理来快速制备高质量的空白脂质体，实现高效的药物包载。

由于透析液在透析过程中对脂质体存在上述一系列影响，因此考虑到透析的目的、脂质体内相及脂质体的稳定性，本发明在选择透析液时，选择与水化介质(硫酸铵溶液)相近或者一致的透析液更利于脂质体内相稳态，选择离子强度低的透析液利于脂质体外相稳定及其贮存。

例如，采用硫酸铵梯度法制备脂质体时，先将磷脂溶于小分子醇(乙醇)中，预热后与预热好的硫酸铵溶液进行混合水化，水化后的样品进行挤出再透析。透析时，先采用水化介质即硫酸铵溶液对脂质体样品进行透析，其优势在于内外相(pH、渗透压、硫酸铵浓度)基本一致。初始透析时，由于乙醇含量仍相对较高，脂双层致密性下降，透析时内外相交换相对频率高，采用水化介质(硫酸铵溶液)透析，可以将对内相的影响降至最低。该透析的主要目的是快速有效的除去小分子醇。当醇含量降低至几乎不影响脂双层致密性后，再用等渗的蔗糖溶液进行透析，除去外相的硫酸铵，以保持脂质体内相硫酸铵浓度及pH环境。相对0.9％氯化钠溶液，蔗糖溶液离子强度相对较低，有利于脂质体这类对离子敏感的载药体系的稳定性。

本发明的有益效果是：