[发明专利]蜕膜淋巴细胞亚型的检测方法、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种蜕膜淋巴细胞亚型的检测方法，其特征在于，包括：

用荧光标记的抗CD3抗体、荧光标记的抗CD4抗体、荧光标记的抗CD8抗体、荧光标记的抗CD56抗体、荧光标记的抗CD16抗体、荧光标记的抗IFN-γ抗体、荧光标记的抗IL-4抗体、和Fixable Viability Dye对同一份待检测蜕膜淋巴细胞样品进行荧光染色，得到染色后样品；

将所述染色后样品经流式细胞术检测，得到检测数据；以及

分析所述检测数据；

其中，所述荧光标记的抗CD3抗体、所述荧光标记的抗CD4抗体、所述荧光标记的抗CD8抗体、所述荧光标记的抗CD56抗体、所述荧光标记的抗CD16抗体、所述荧光标记的抗IFN-γ抗体、所述荧光标记的抗IL-4抗体、和所述Fixable Viability Dye在所述流式细胞术检测时，可具有不同的发射光波长。

2.如权利要求1所述的检测方法，其中所述荧光染色的步骤包括：

将所述待检测蜕膜淋巴细胞样品与所述荧光标记的抗CD3抗体、所述荧光标记的抗CD4抗体、所述荧光标记的抗CD8抗体、所述荧光标记的抗CD56抗体、所述荧光标记的抗CD16抗体、和所述Fixable Viability Dye共孵育，得到中间样A；

对所述中间样A进行细胞固定和透膜处理，得到中间样B；以及

将所述中间样B与所述荧光标记的抗IFN-γ抗体和所述荧光标记的抗IL-4抗体共孵育，得到所述染色后样品。

3.如权利要求1所述的检测方法，其中所述分析的方法包括：

a.建立FSC/Fixable Viability Dye密度图，将在伪彩图显示模式下最靠近右下方的细胞群落设门标记为P1；

b.对所述P1内细胞依次通过SSC-H/SSC-W和FSC-H/FSC-W设门去除粘连体；

c.对去除粘连体后的细胞群以CD3/CD56十字门设门；

d.对CD3^-CD56⁺细胞群以CD56/CD16设门，对CD56⁺⁺CD16^-细胞群经椭圆门设门，所得细胞群为蜕膜NK细胞亚群；

e.对CD3⁺CD56^-细胞群以CD4/CD8十字门设门，所得CD4⁺CD8^-细胞群为Th细胞亚群，所得CD4^-CD8⁺细胞群为Tc细胞亚群；CD3⁺CD56⁺细胞群为NKT-like细胞亚群；以及

f.对所述Th细胞亚群、所述Tc细胞亚群、所述蜕膜NK细胞亚群和所述NKT-like细胞亚群分别以IFN-γ/IL-4十字门设门，所得IFN-γ⁺IL-4^-细胞群为相应的1型亚群，所得IFN-γ^-IL-4⁺细胞群为相应的2型亚群。

4.一种采用如权利要求1至3中任一项所述的蜕膜淋巴细胞亚型的检测方法检测蜕膜淋巴细胞亚型的试剂盒，其特征在于，包括：荧光标记的抗CD3抗体、荧光标记的抗CD4抗体、荧光标记的抗CD8抗体、荧光标记的抗CD56抗体、荧光标记的抗CD16抗体、荧光标记的抗IFN-γ抗体、荧光标记的抗IL-4抗体、和Fixable Viability Dye；其中，所述荧光标记的抗CD3抗体、所述荧光标记的抗CD4抗体、所述荧光标记的抗CD8抗体、所述荧光标记的抗CD56抗体、所述荧光标记的抗CD16抗体、所述荧光标记的抗IFN-γ抗体、所述荧光标记的抗IL-4抗体、和所述Fixable Viability Dye在所述流式细胞术检测时，可具有不同的发射光波长。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其中所述荧光标记的抗CD3抗体、所述荧光标记的抗CD4抗体、所述荧光标记的抗CD8抗体、所述荧光标记的抗CD56抗体、所述荧光标记的抗CD16抗体、所述荧光标记的抗IFN-γ抗体、和所述荧光标记的抗IL-4抗体的荧光标记依次为PerCP、APC、FITC、PE-Vio770、VioBlue、APC-Vio770和PE。