[发明专利]鸡传染性法氏囊病灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明属于生物制品领域，具体涉及鸡传染性法氏囊病灭活疫苗及其制备方法，其包括以下步骤：A)LMH细胞的传代与培养；B)病毒接种；C)制苗毒液的繁殖；D)成品的制备。采用该方法制备得到的疫苗效力稳定，免疫效力高、安全性高，且其生产工艺简单，易操作。

技术领域

本发明属于生物制品领域，具体涉及鸡传染性法氏囊病灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease IBD)是由传染性法氏囊病病毒的(IBDV)引起的一种危害幼鸡的急性、高度接触性传染病。鸡传染性法氏囊病是严重威胁我国养鸡业的重要传染病之一，其一方面死亡率高、淘汰率高，另一方面容易导致免疫抑制，使多种有效疫苗对鸡的免疫应答水平下降，造成免疫失败，使鸡对病原易感性增加，造成巨大的经济损失。

目前，国内用于防治鸡传染性法氏囊病的疫苗主要分为活疫苗和灭活疫苗。活疫苗毒力强，但容易造成鸡自身法氏囊的严重损伤，现在一般不用或谨慎使用。灭活疫苗是将病变组织或培养病毒液经过灭活后制成的，经灭活疫苗免疫后的种母鸡，其后代雏鸡一般具有较高的母源抗体，并且免疫持续时间较长，但灭活疫苗仅适用于种鸡，且免疫效果不明显。

目前多是通过加入免疫增强剂来解决灭活疫苗免疫效果不明显的问题。免疫增强剂增强疫苗的免疫效果已获得肯定，然而目前广泛使用的油乳类、铝胶类等化学佐剂常有副作用大、残留时间长、机体吸收缓慢等弊端。随着人们对绿色畜产品的迫切需求，研制开发来源广泛、效果显著、毒副作用小的新型免疫增强剂越来越受到人们的重视。而经研究发现，多数中药成分能提高血清抗体效价、促进淋巴细胞转化，因此，使用复方中药成分作为免疫增强剂成为可能。

如中国专利申请CN105435219A公开了一种鸡传染性法氏囊病复合灭活疫苗的制备方法，包括以下工艺步骤：1)病毒增殖；2)鸡传染性法氏囊病复合灭活疫苗制备，在每1000ml灭活检验合格的鸡传染性法氏囊病病毒抗原液中加入1～2份免疫增强剂混合均匀，然后与桑米特家畜水包油包水佐剂按体积比3:2进行乳化分装制成鸡传染性法氏囊病复合灭活疫苗。该发明涉及一种免疫增强剂，含有中药黄酮、维生素组合和法氏囊素，所述中药黄酮由菊花、生地、蔓荆子、龙胆草、黄芩、土茯苓和玄参组成。该免疫增强剂，大幅度提高了机体的免疫力，提高灭活疫苗细胞免疫能力，刺激机体产生高效的中和抗体，提高了机体预防疾病的能力。

裂褶菌多糖(SPG)是从裂褶菌菌子实体、菌丝体以及发酵液中提取出来的水溶性多糖，结构为β-(1-3)糖苷为主链，具有β-(1-6)糖苷位侧链的β-D-葡聚糖；美人蕉花为美人蕉科多年生草本植物美人蕉的花；吲哚美辛为非淄体抗炎药，目前还未见将三者联用用于免疫增强的报道。

发明内容

本发明旨在提供一种鸡传染性法氏囊病灭活疫苗及其制备方法，该疫苗其中含有的裂褶菌多糖、美人蕉花提取液和吲哚美辛具有协同增效的作用，能显著提高疫苗的免疫水平，提高抗体水平，且其效力稳定，安全性高，生产工艺简单，易操作。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：鸡传染性法氏囊病灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：

A)LMH细胞的传代与培养：取LMH传代细胞系经EDTA-胰酶细胞分散液消化传代，在培养瓶中以细胞生长液继续培养，形成良好单层时，用于传代或接种病毒；

B)病毒接种：取鸡传染性法氏囊病毒B87株，按终体积1:50～1:500接种于上述制好的LMH传代细胞中，并在36～37℃吸附30～60min后吸去病毒液，加入维持液，置于37～38℃、含5％CO₂的环境下继续培养至细胞病变率达75％以上时收获细胞液；

C)制苗毒液的繁殖：取步骤A)中已形成良好单层的细胞系培养瓶，弃去细胞生长液，接种含有1％法氏囊细胞适应毒B87株的维持液，于37～38℃继续继续培养，当细胞病变达75％以上时收获毒液，于-15℃以下保存；