[发明专利]鸡传染性法氏囊病灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.鸡传染性法氏囊病灭活疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

A)LMH细胞的传代与培养：取LMH传代细胞系经EDTA-胰酶细胞分散液消化传代，在培养瓶中以细胞生长液继续培养，形成良好单层时，用于传代或接种病毒；

B)病毒接种：取鸡传染性法氏囊病毒B87株，按终体积1:50～1:500接种于制好的LMH传代细胞中，并在36～37℃吸附30～60min后吸去病毒液，加入维持液，置于37～38℃、含5％CO₂的环境下继续培养至细胞病变率达75％以上时收获细胞液；

C)制苗毒液的繁殖：取步骤A)中已形成良好单层的细胞系培养瓶，弃去细胞生长液，接种上述步骤B)得到的细胞液，于37～38℃继续继续培养，当细胞病变达75％以上时收获毒液，于-15℃以下保存；

D)成品的制备：将步骤C)制备得到的毒液进行无菌检验、病毒含量测定，采用0.1％福尔马林灭活，在每1000ml灭活检验合格的鸡传染性法氏囊病病毒抗原液中加入0.5～2份免疫增强剂，混合均匀；按96:4的重量比加入灭菌后的吐温-80，搅拌使之溶解后，加入白油90～100份、硬脂酸铝1～3份、司盘-80，4份，搅拌，高压灭菌，乳化，分装，即得；

所述步骤D)中添加的免疫增强剂为每1000ml中含有裂褶菌多糖15g、新鲜美人蕉花提取液5g、吲哚美辛1.5g、莎梵婷1g、蔗糖32g和明胶5g的磷酸缓冲液。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述新鲜美人蕉花提取液由以下步骤制得：

取美人蕉花或花蕾，取其花瓣，磨碎，加入蒸馏水，置三角瓶中，密封，90～100℃恒温水浴20～35min，迅速冷却，常温离心5～10min，取上清液，即得。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞生长液为含有5～10％胎牛血清的90％DMEN培养液。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述维持液为含5～10％新生牛胎牛血清和2％谷氨酰胺的98％DMEN培养液。