[发明专利]一种冬樱离体快繁方法

说明书

技术领域

本发明属植物组织培养技术领域，更具体地说，本发明涉及一种冬樱离体快繁方法。

背景技术

冬樱(Cerasus×parvifolia‘Fuyu-zakura’)为豆樱与大岛樱的杂交品种，成叶小，又称小叶樱；小乔木，宽卵状树形。每年开花两次，冬花期为11月上旬至次年1月，因此而得名；春花期为3月下旬，花叶同放，花量比冬花大。伞房花序，1～4朵一束；花径约3cm；春花的先端缺刻深，冬花的先端缺刻浅，逆突形，花梗无毛，萼筒钟状，紫绿色，无毛，萼片长椭圆形，全缘，无毛；花瓣5枚，白色至淡红色。雌蕊无毛，柱头花柱与花柱同等高度的位置。果实直径1厘米，果黑熟有甜味。“三波川的冬樱”被指定为“天然纪念物”。我国武汉东湖等公园有少量引种栽培，生长表现良好。一年冬春两次，跟其他品种搭配，极大地延长了樱花园的观花期，开发前景广阔。

目前，由于冬樱的母株材料少，嫁接繁殖数量有限，远远满足不了市场推广需求，迫切需要通过组培快繁技术进行扩繁，以冬樱成年优株为母株进行组培快繁技术研究，通过离体快繁促进冬樱产业化开发，意义现实而重大。

经过文献检索，尚未见关于冬樱组培快繁的报道。试验表明，现发表的樱属植物相关种组织培养所用的配方并不适合冬樱的离体繁殖，容易出现初代培养的褐化、继代中玻璃苗大量产生、芽伸长生长慢、有效芽少、顶芽枯死等问题，导致增殖系数小，成苗质量差，繁殖速度慢，生产成本高。

发明内容

本发明的目的在于：克服现有技术中关于冬樱离体快繁方法匮乏、相关培养基对冬樱离体快繁效果差的问题，提供一种冬樱的离体快繁方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供了一种冬樱离体快繁方法，其包括如下步骤：

(1)外植体预处理及采集：剪取外植体前，每隔3～4天用多菌灵或百菌清溶液800倍交替喷洒冬樱树体2～3次，剪取冬樱的上半木质化枝条作为外植体(天气晴朗的上午为宜)，保湿带回实验室后，氯气熏蒸20min，除叶，用洗洁精溶液浸泡5min后，用软毛笔蘸洗洁精溶液仔细地轻轻刷洗枝条各部(切勿刷掉托叶)，然后用纯净水洗净，低温保湿备用；

(2)外植体消毒和腋芽诱导：枝条用无菌水清洗两遍后，使用次氯酸钠和升汞对外植体进行消毒，然后接种到诱导培养基上培养得到腋芽，诱导培养基以1/2YD为基本培养基，每升添加6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)0.5～1.0mg、KT(激动素)0.1～0.5mg、IBA(吲哚丁酸)0～0.1mg、NAA(萘乙酸)0.05～0.1mg、蔗糖20～40g、琼脂6g，pH为5.8～6.0；

(3)增殖培养：将腋芽切下接种到增殖培养基上培养得到增殖苗，增殖培养基以YD为基本培养基，每升添加6-BA0.4～0.8mg、KT0.1～0.5mg、IBA0～0.1mg、NAA0～0.1mg、GA₃(赤霉素)1～5mg、蔗糖20～40g、琼脂5.6g，pH为5.8～6.0；

(4)生根培养：将增殖苗的嫩芽切取并接种到生根培养基中培养得到生根苗，生根培养基以1/2YD培养基为基本培养基，每升添加NAA0.1～0.5mg、IBA0.1～0.5mg、蔗糖15～20g，琼脂5.6g，pH为5.8～6.0；

(5)炼苗与移栽：将生根苗移到温室进行炼苗移栽，得到冬樱种苗。

作为本发明冬樱离体快繁方法的一种改进，步骤(1)中，所述氯气熏蒸是将外植体盛入玻璃器皿中，放入直径400mm的干燥皿内，用1g/片药片的1/4(0.25g二氧化氯片作用量)与水反应释放的氯气密闭熏蒸干燥皿内的外植体20min。

作为本发明冬樱离体快繁方法的一种改进，步骤(2)和(3)中，所述培养条件为24±2℃，光照强度2000lx，光照时间12h/天。

作为本发明冬樱离体快繁方法的一种改进，步骤(4)中，所述培养条件为25±2℃，光照强度2000lx，光照时间12h/天。