[发明专利]一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于载玻片领域，具体涉及一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法。

背景技术

液基薄层细胞检测技术自上世纪从欧美引入我国，现在已广泛应用于肿瘤预防检查和筛查的医学检测。而液基培养专用载玻片是液基制片的核心技术，制片染色好不好直接与载玻片的粘附性有关，也是制约液基细胞技术的关健所在。如果载玻片质量不过关，则导致细胞量少且染色效果不好，细胞分布不均，甚至无细胞的白片。

为使染色效果显著、细胞分布均匀并紧密与玻片表面结合，必须先对普通载玻片表面进行清洁处理，后进行物理化学修饰。目前载玻片表面清洁方法主要有以下几种：硫酸清洗法(包括浓硫酸-乙醇法和浓硫酸-双氧水法)、重铬酸钾清洗法，这些方法都可达到使载玻片表面清洁的效果。载玻片表面化学修饰方法包括羧基化、氨基硅烷化、炔基化、醛基化、环氧基化等。

目前，国内的普通粘附载玻片部分为疏水性粘附载玻片，这种疏水性粘附载玻片在仪器上使用时经常会出现染色不均匀的缺点。而部分的亲水粘附载玻片也并非液基培养专用载玻片，在液基薄层细胞检测仪器中检测时也存在脱片率高及染色不均匀的缺点。因此，解决普通粘附载玻片在液基薄层细胞检测时的缺陷，具有重要意义。

中国专利【CN 104805590 A】公开了一种羧基修饰的基因芯片基片及其制备方法，以普通玻璃为载体，先后进行甲醇-盐酸溶液和硫酸清洗，通过硅烷化试剂进行硅烷化修饰，后进行羧基修饰。本发明先后选用甲醇-盐酸溶液、硫酸进行表面清洗，存在以下问题：甲醇易挥发，有毒性，若操作人员不慎吸入或接触到皮肤，有害健康；后用浓硫酸清洗，硫酸具有腐蚀性，安全性低。

中国专利【CN 106345544 A】公开了一种微阵列用氨基修饰基片及制备方法。该制备方法主要通过浓硫酸与双氧水的混合溶液浸泡玻璃基片，后在其表面进行氨基硅烷化处理，在获得表面富含氨基的玻璃基片的基础上进行多聚赖氨酸涂层，最终获得活性氨基修饰的玻璃基片。本发明将玻璃基片在浓硫酸双氧水混合液中浸泡13～18h,耗时过长，且配置混合液时，双氧水与浓硫酸反应，剧烈放热甚至会出现爆沸现象，安全性过低。氨基硅烷化处理时玻璃表面的羟基与氨基硅烷脱醇缩合后氨基化，用长疏水链的脂肪酸和氨基反应，最终在玻璃表面形成带有疏水链的一层膜，基片最终呈疏水性，在细胞检测时容易出现脱片现象。

中国专利【CN 101831504 A】公开了一种炔基修饰的基因芯片及制备方法。该制备方法主要先用玻璃、硅片、金、银、铁、锌、铜、壳聚糖、葡聚糖、聚乙烯醇、纤维素、聚丙烯酰胺、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚乳酸制备好基因芯片，再通过分子自组装技术将三乙氧基硅炔组装在羟基化或氨基化的基因基片载体表面，形成一层末端为叁键的单分子自组装膜，从而获得炔基修饰的基因基片。本发明将玻璃基片通过分子的自组装技术进行处理时，存在以下问题，未预先处理玻璃基片表面并不能形成易岑末端为叁键的单分子组装膜，且若先预先处理玻璃基片则存在着成本过高，不利于液基薄层细胞检测的大范围应用，并且操作难度高，对操作人员的操作要求极高。

中国专利【CN 105220237 A】公开了一种微列阵用活性醛基修饰基片及其制备方法，该制备方法主要通过用浓硫酸与纯化水清洗，然后用多聚赖氨酸包被，最后使用戊二醛引入活性醛基基团，从而得到活性醛基修饰基片。该发明制备方法简单，成本低，但是因为多聚赖氨酸包被工艺本身存在的问题，要控制环境的无菌无尘，并且多聚赖氨酸的存储温度要求比较高，所以这种氨基修饰的玻片存在着固定量低同时灵敏度不高的问题。

发明内容

发明目的：本发明的目的在于克服普通粘附载玻片在液基薄层细胞检测时经常出现染色不均匀以及细胞脱片的缺点，提供一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法。

技术方案：一种液基培养亲水性低脱片率粘附载玻片的制备方法，包括如下步骤：

1)将载玻片浸泡于一定质量分数的清洁液溶液中，浸泡5-15分钟；用去离子水检测其亲水性，若亲水，则表面洁净，继续后续操作；

2)将上述表面洁净的载玻片在20℃—80℃下，浸泡在质量分数为0.4‰—4％的粘附母液溶液中，浸泡20-30分钟；其中粘附母液有效成分为质量分数为0.1％-2％的聚酰胺类及0.2％-1％的醚类物质；

3)将上述载玻片取出，去离子水清洗，烘干，得到亲水性低脱片率粘附载玻片。

作为优选方案：所述载玻片为超白玻璃材质，单面单头彩色涂装，大小为76*26，厚度1—1.2mm。