[发明专利]一种香樟的组织培养方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及植物培育繁殖技术领域，具体涉及一种香樟的组织培养方法。

【背景技术】

香樟树是一种重要的多种用途生态和经济树种，其木材致密美观，具有芳香味，防虫击蚊之用；香樟树树姿秀丽，四季常青且枝叶茂密，具有很强吸尘能力和抗雾霾能力；香樟树的木材、根、叶及果实皆含精油，是天然樟脑，芳香油和芳香醇的重要来源，其精油和芳香醇价格每吨18-32万之间，其精加工产品涉及众多领域和行业。

在培育过程中，香樟树通常以种子进行繁殖，后代变异极大，扦插繁殖和分蘖繁殖等能最大限度保持母本优良特性，生产成本相对较低，而随着香樟树特色资源利用水平的不断提高，特别是产业脱贫项目上，扦插繁殖难于在短时间内满足规模化生产的需求，还具有根系不发达，浪费枝条等缺点，因此，研究出一种缩短其育苗时间、提高出芽存活率，满足规模化生产的香樟组培技术有着十分重要的意义。

【发明内容】

有鉴于此，本发明的目的在于，提供一种香樟的组织培养方法，本发明的香樟的组织培养方法在含有不同激素配比的WPM培养基上诱导香樟的愈伤组织，通过诱导培养基、增殖培养基以及生根培养基的培养，获得香樟的再生苗，其培养方法取材方便，材料来源、数量充足，容易获得无菌材料，能够用较少的优良母本，繁殖出大批量的种苗，适用于规模化生产。

为了解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：

一种香樟的组织培养方法，具体包括如下步骤：

(一)外植体的预处理：剪取经过挖根处理后长出的嫩芽作为外植体，将外植体剪成4-6cm的条状物，然后用大蒜汁将外植体浸泡15-30min(浸泡时间长短视材料木质化程度而定)，浸泡过程不断进行振荡，浸泡完成后用无菌水将外植体冲洗4-6次，然后放置于无菌接种盘吹干其表面水分，切去叶片以及旧的切口，切成2-2.5cm带3个芽的茎段，将带芽茎段置于自来水下冲洗30min，用滤纸吸干带芽茎段备用；

(二)培养基的培养：

(1)诱导培养：将上述步骤获得的带芽茎段先接种到诱导培养基上，黑暗条件下培养5-10天，然后按光照和黑暗时间比为2:1交替进行诱导培养，诱导新芽长高至4-5cm后，将新芽的叶片切去，切成2-3cm的茎段；

所述诱导培养基含有WPM培养基+2.5mg/L 6-BA+0.25mg/L NAA+4.5g/L琼脂+30g/L蔗糖；

(2)增殖培养：将步骤(1)培养后处理得到的茎段接种到增殖培养基上培养35-40天后，将新芽转到新的增殖培养基培养，增殖倍数达到3-4倍；

所述增殖培养基的成分为：WPM+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+3.5g/L琼脂+25g/L蔗糖；

(3)生根培养：将经步骤(2)增殖培养得到的丛芽切除其多余的侧面芽或不定芽，按照高度为1.5-3cm将具有单芽的小枝剪切下来，然后将剪切后的小枝放到生根培养基进行生根培养，培养24-26天后即可出瓶炼苗；

所述生根培养基的成分为：WPM+2.0mg/L生根粉+4.5g/L琼脂+30g/L蔗糖；

上述三种培养基的制备方法是将组成培养基的原料混合搅拌均匀后，将其煮沸至PH值调节至5.6-6.0，然后装入培养器皿中，在120-123℃高温下蒸汽灭菌15-20min后进行冷却，得到培养基备用；

(三)大棚炼苗：用镊子将小苗从培养器皿中取出，用自来水将小苗根部的培养基洗净，然后种植到培养土苗盘里并喷淋定根水，待叶面干后，喷施800-1000倍液的农用链霉毒，7-15天后喷施20-30倍的沼气液，在大棚内培育3-5个月后进行移栽。

优选地，所述组织培养方法还包括外植体准备的步骤，具体为：通过检测取含精油量和芳香醇高的香樟树作为母体，将母体进行挖根处理，经过挖根处理待断根处长出嫩芽后，取断根位置新长出的嫩芽作为外植体。

优选地，步骤(1)所述诱导培养是在温度为26-28℃，湿度为65-80％，PH值为5.6-6.0的条件下进行的，诱导培养中的光照为自然光照2000-2500Lux。

优选地，步骤(2)所述增殖培养是在温度为26-28℃，湿度为50-75％，PH值为5.6-6.0的条件下进行的，所述增殖培养光照强度为2000-3000Lux，光照时度为12-14h/天。

优选地，步骤(3)所述生根培养是在温度为24-27℃，湿度为40-60％，PH值为5.6-6.0，光照强度为2000-3000Lux，光照时度为12-14h/天的条件下进行的。