[发明专利]一种人类红细胞ABO血型抗原多重PCR分型方法及试剂盒

说明书

本发明涉及一种人类红细胞ABO血型抗原多重PCR分型方法及试剂盒，采用多重PCR，设计4对特异性引物，分别扩增O、非O、B和非B，以beta‑actin为内参，组成2个多重PCR反应体系，根据扩增条带的有无，即可初步判断样本的ABO血型。本发明将多重PCR方法引入ABO血型基因分型；利用O等位基因和B等位基因的SNP位点，实现ABO血型基因分型。本发明的方法可减少ABO抗原基因分型的单人次PCR反应次数，降低检测的人力和试剂成本，提高检测通量，缩短大样本量检测所需时间。

技术领域

本发明涉及分子生物学和临床诊断技术领域，具体地说，是一种人类红细胞ABO血型抗原多重PCR分型方法及试剂盒。

背景技术

人类ABO基因位于9号染色体，由A、B和O三个复等位基因控制，包含长度大小从28～688bp不等的7个外显子和长度约为19514bp的6个内含子，总长大约为18～20kb。其基因编码产物是糖基转移酶，多数编码序列位于第6和第7外显子上，负责编码糖基转移酶的催化区域。这些转移酶控制ABO血型抗原的生物合成，从而决定其血型。ABO血型系统是人类血型系统中免疫原性最强的血型系统，在输血医学以及器官、干细胞移植等临床医学中有重要作用。现有技术中，人类ABO血型检测方法主要有两种：一是经典的血清学方法，二是基因分型方法。血清学方法具有简单实用等特点，但也存在一定的局限性，首先需要新鲜红细胞样品，对样本要求较高；其次方法检测的范围较窄，只能对ABO血型中的常见血型进行定型，对于一些亚型标本以及罕见样本，在血型检测时易出现正反定型不符，难以定型或定型错误的现象，且不能确定其具体基因型。基因分型的方法在某种程度上弥补了经典血清学方法在这方面的不足。

中国专利201410271048.6公开了一种用于检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组及试剂盒，用于ABO血型基因测定的引物组包括ABOINTRON2396G引物对，ABOINTRON2396C引物对，ABOEXON7272A引物对，ABOEXON7272T引物对，ABOEXON7429C引物对，ABOEXON7429G引物对，ABOEXON7635G引物对，ABOEXON7635A引物对，ABOEXON622A引物对，ABOEXON7688G引物对，ABOEXON7688C引物对及内参引物对。中国专利201010174588.4公开了一种用于ABO血型基因分型的PCR-SBT方法，包括下述步骤：制备人基因组DNA；扩增ABO基因外显子1、外显子2-4、外显子5-7的片段；得到扩增产物进行双酶切纯化；将纯化产物进行测序PCR反应；将测序产物进行醋酸钠-乙醇沉淀法纯化，进行毛细管电泳测序；将获得的序列通过软件分析，确定其基因型。上述技术方案用于人类红细胞血型ABO抗原的基因分型，单个人份需要较多的PCR反应次数(>6次)，扩增步骤较多，不适合大量样本的分析与鉴定。多重PCR是在普通PCR的基础上加以改进，在同一PCR反应体系里运用2对或2对以上引物，针对多个DNA模板或同一模板的不同区域扩增多个目的片段的PCR技术，目前已经被广泛应用于生命科学的各个研究领域。由于ABO血型在临床上十分重要，现在已经出现了大量的针对ABO基因分型的PCR-SSP方法，针对不同抗原的各个SNP的引物设计也很多。同时，多重PCR方法也是一个应用非常广泛的技术。目前现有技术中，关于本发明的人类红细胞ABO血型抗原多重PCR分型方法，目前还未见报道。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有技术中的不足，提供一种用于人类红细胞ABO血型抗原多重PCR分型方法。

本发明的第二个目的是针对现有技术中的不足，提供一种用于人类红细胞ABO血型抗原分型的引物组合。

本发明的第三个目的是针对现有技术中的不足，提供一种人类红细胞ABO血型抗原多重PCR分型试剂盒。

本发明的第四个目的是针对现有技术中的不足，提供如上所述多重PCR分型方法的用途。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：