[发明专利]一种同时测定烟草中常用除草剂残留量的方法

权利要求书

1.一种同时测定烟草中常用除草剂残留量的方法，其特征在于：烟草样品中目标物经酸化乙腈提取，用弗罗里硅土固相萃取小柱净化，体积比为3:7的丙酮/环己烷的混合液洗脱，洗脱液浓缩后用三甲基硅烷化重氮甲烷衍生化，再利用在线凝胶渗透色谱-气相色谱-串联质谱联用仪进行检测，该方法具体的操作步骤如下:：

（1）内标溶液的配制：配制丙草胺浓度为10 μg/mL的丙酮内标溶液；

（2）衍生剂：2 mol/L三甲基硅烷化重氮甲烷正己烷溶液；

（3）除草剂目标物的提取: 称取2.00 g烘干磨好的烟叶样品，加入2 mL超纯水润湿10min，依次加入2 g氯化钠、50 μL步骤(1)配制的内标溶液、10 mL 含1 %乙酸的乙睛溶液，以2500 rpm涡旋震荡5 min，再以5000 r/min离心5 min，待净化；

（4）弗罗里硅土固相萃取柱活化：用5 mL丙酮/环己烷混合液活化柱子，弃去流出液；

（5）弗罗里硅土固相萃取柱净化: 精确移取2 mL步骤（3）的提取液至步骤（4）活化后的固相萃取柱中，用10 mL丙酮/环己烷混合液洗脱小柱，丙酮/环己烷体积比3:7，收集洗脱液至具盖玻璃试管中；

（6）洗脱液浓缩: 将步骤（5）得到的洗脱液在40 ℃水浴氮吹浓缩至1mL，待衍生化；

（7）衍生化：在步骤（6）浓缩液中加入100 μL步骤（2）的衍生剂，密封涡旋混匀，放置于40 ℃水浴中进行衍生化反应30 min，40 ℃氮吹浓缩至近干，精确加入体积比为3:7 的1mL丙酮/环己烷，涡旋混匀，过0.45μm有机相滤膜，待GPC-GC-MS/MS检测；

（8）标准储备液配制: 分别称取10 mg的麦草畏、2,4-滴、氟乐灵、氟草胺、2,4,5-涕、异恶草酮、双苯酰草胺、甲草胺、敌草胺、敌草索、仲丁灵、异丙乐灵、二甲戊灵、氟节胺、除草醚和精吡氟禾草灵标准品，用丙酮定容于10 mL容量瓶中，制得1000 μg/mL的标准储备液，-20℃保存；

（9）混合标准溶液配制：取步骤（8）中标准储备液各100 μL至10 mL容量瓶中，用丙酮稀释定容至10 mL，制得10 μg/mL的混合标准溶液，2~8 ℃保存；

（10）空白烟草样品基质工作溶液的配置：取步骤（9）的混合标准溶液，以不同的体积加入步骤（6）待衍生化的空白烟叶的萃取基质中，按步骤（7）进行衍生化，制得不同浓度的16种除草剂烟草基质标准工作溶液，涡旋混匀，过0.45μm有机相滤膜，待GPC-GC-MS/MS检测；

(11) GPC-GC-MS/MS测定：将步骤（7）中样品提取液和步骤（10）中的基质混合标准溶液，注入GPC-GC-MS/MS进行测定；

（12）结果计算：按内标法以相对峰面积对其相应浓度进行回归分析，计算出样品待测液中16种除草剂的含量；

步骤（11）中GPC测定时的采用的条件为：色谱柱为Shodex CLNpak EV-200，流动相为丙酮-环己烷混合溶液，丙酮和环己烷体积比为3:7，流速为0.1 mL/min，柱温为40 ℃，进样量为10 µL，目标物的收集片段为3.46~3.57 min。

2.根据权利要求1所述的一种同时测定烟草中常用除草剂残留量的方法，其特征在于：步骤（11）中GC-MS/MS测定时采用的条件为：色谱柱为惰性石英毛细管：预柱、捕集柱为DB-5MS柱、分离柱为DB-5MS柱；PTV进样模式；进样口升温程序：120 ℃，保持5 min，以100 ℃/min升至250 ℃，保持30 min；色谱柱升温程序:82 ℃，保持5 min，以8 ℃/min升至280 ℃，保持5 min，总运行时间为30 min；电子轰击离子源EI；电子能量:70 eV；离子源温度: 230℃；接口温度:280 ℃；溶剂延迟时间:12 min；检测器电压：1.0 KV；碰撞气流速：氦气1.5mL/min；数据扫描方式:正离子；测定方式：选择反应监测方式MRM。

3.根据权利要求1所述的一种同时测定烟草中常用除草剂残留量的方法，其特征在于：步骤（11）中GPC-GC/MSMS测定具体操作为：取烟草提取液和不同浓度的麦草畏、2,4-滴、氟乐灵、氟草胺、2,4,5-涕、异恶草酮、双苯酰草胺、甲草胺、敌草胺、敌草索、仲丁灵、异丙乐灵、二甲戊灵、氟节胺、除草醚和精吡氟禾草灵的空白烟草基质混合标准溶液，注入GPC-GC-MS/MS进行测定，按内标法以相对峰面积对其相应浓度进行回归分析，计算出样品待测液中麦草畏、2,4-滴、氟乐灵、氟草胺、2,4,5-涕、异恶草酮、双苯酰草胺、甲草胺、敌草胺、敌草索、仲丁灵、异丙乐灵、二甲戊灵、氟节胺、除草醚和精吡氟禾草灵的含量。