[发明专利]一种苗药黑骨藤的组培快繁方法

说明书

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种苗药黑骨藤的组培快繁方法，包括依次进行的如下步骤：获取黑骨藤的外植体、外植体诱导、不定芽的增殖培养、不定芽的生根培养、试管苗移栽；所述的外植体诱导的诱导培养基包括：MS培养基、3.0～5.0mg/L KT、1.5～2.0mg/L 6‑BA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH为5.4～5.8，本发明的方法的苗药黑骨藤试管苗移栽成活率达到95％以上。

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及苗药黑骨藤的组培快繁方法。

背景技术

苗药黑骨藤(Periploca forrestil Schltr)，又名黑龙骨、滇杠柳等，为萝藦科杠柳属藤状灌木，为苗族民间广泛应用于治疗闭合性软组织损伤、风湿与类风湿等疾病的民族药，其富含C21甾类、强心苷类、萜类等物质。黑骨藤作为一种苗药，其历史悠久，早在西汉刘向的《世说新语说苑辨物》中便有：“吾闻古之为医者，曰苗父，医道精纯，方剂独特，为世人称道”的记载，清代《马关县志风俗篇》中就有“苗人良药接骨祛风，其效如神”的描述。由于苗族人经常性含服黑骨藤，因此苗族人不易患风湿类疾病。目前已开发出黑骨藤追风活络胶囊、黑骨藤伸筋透骨液等治疗风湿类疾病中成药。

鉴于目前国内对黑骨藤的组织培养相关研究未见有报道，本发明选择黑骨藤带节茎段为外植体，经诱导、增殖、生根、炼苗以及移栽等步骤，建立了苗药黑骨藤的组织培养技术体系。本发明具有技术性强、成本低廉、成苗快等特点，可直接用于黑骨藤种苗的工厂化生产，对于促进苗药黑骨藤的资源开发利用具有重要的现实意义。

目前，国内外尚未有黑骨藤组织培养技术的报道，也未有黑骨藤组培快繁专利的申请。

发明内容

本发明的目的是提供一种苗药黑骨藤的组培快繁方法，本发明选择黑骨藤带节茎段为外植体，经诱导、增殖、生根、炼苗以及移栽等步骤，建立了苗药黑骨藤的组织培养技术体系，从而实现了本发明的目的。

本发明提供的技术方案为：一种苗药黑骨藤的组培快繁方法，包括依次进行的如下步骤：获取黑骨藤的外植体、外植体诱导、不定芽的增殖培养、不定芽的生根培养、试管苗移栽；

所述的外植体诱导的诱导培养基包括：MS培养基、3.0～5.0mg/L KT、1.5～2.0mg/L6-BA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH为5.4～5.8。

在上述的苗药黑骨藤的组培快繁方法中，所述的外植体诱导的方法为：将黑骨藤外植体经清洗消毒处理后切成1.5～2.5cm左右的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于25～28℃进行全暗培养30～35天即可诱导形成不定芽。

在上述的苗药黑骨藤的组培快繁方法中，不定芽的增殖培养所用的增殖培养基包括：MS培养基、2.0～3.0mg/L KT、0.5～1.0mg/L NAA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.1～0.5g/L活性炭，pH为5.4～5.8。

在上述的苗药黑骨藤的组培快繁方法中，所述的不定芽的增殖培养的方法具体为：将经过外植体诱导得到的不定芽切成长约1～1.5cm的茎段并接种到增殖培养基中培养25～30天即可实现不定芽的增殖。

在上述的苗药黑骨藤的组培快繁方法中，不定芽的生根培养所用的生根培养基包括：1/2MS培养基、1.0～2.0mg/L GGR、0.5～1.0mg/L NAA、15～20g/L蔗糖、3.0～4.0g/L琼脂、0.1～0.3g/L活性炭，pH为5.4～5.8。

在上述的苗药黑骨藤的组培快繁方法中，所述的不定芽的生根培养的方法为：从经过增殖培养得到的不定芽的基部切取长约1.5～2.0cm的不定芽并接种到生根培养基中培养25～30天即能实现试管苗的生根。