[发明专利]一种细胞模型及其构建和筛选五羟色胺受体靶点活性物质之应用

说明书

本发明公开了一种稳定表达5‑HT1B(五羟色胺)基因的细胞模型及其构建的方法，以及其在筛选以5‑HT1BR(五羟色胺受体)为靶点的活性物质中的应用，如筛选抗抑郁和偏头痛疾病药物。本发明细胞模型是携带并能稳定表达5‑HT1B基因的哺乳动物细胞，其构建方法是将5‑HT1B基因与表达载体连接构建成重组质粒后导入哺乳动物细胞，经过筛选培养获得能稳定表达5‑HT1B基因的细胞株，可用于筛选以5‑HT1BR为靶点的活性物质，通过将待筛选物质加入到细胞模型培养基中，测定应答元件的产量或被激活程度来判断该物质是否被筛出，能够高通量、低成本、准确地筛选以5‑HT1BR为靶点的活性物质，具有很好的稳定性和可靠性。

技术领域

本发明属于基因工程及分子药理学技术领域，涉及一种基因表达细胞模型及其构建方法和应用，具体涉及一种稳定表达5-HT1B(五羟色胺)基因的细胞模型及其构建的方法，以及该细胞模型在筛选以5-HT1BR(五羟色胺受体)为靶点的活性物质中的应用。

背景技术

随着社会进步，环境污染和生活压力的日益加重，神经性疾病越来越多地困扰着人类，针对神经性疾病的新药创制已经被列入国家重点发展战略，也成为全球各大药物研发公司关注的焦点。多数人类五羟色胺受体在中枢神经系统中较为丰富,参与多种精神活动的调节,与精神疾病的关系较为密切，因为其独特的生理功能成为精神类疾病药物研发的焦点。

五羟色胺受体是中枢神经系统中的一个重要受体，属于A族GPCR，是以五羟色胺为配体的受体。5-HT1BR与很多精神疾病的发生密切相关，如抑郁症、精神分裂症、焦虑症、强迫症、惊恐障碍等。一些药物可以通过调节5-HT系统的神经传递治疗多种精神障碍。5-HT1受体是5-HT受体中最大的一组受体亚型，可分为5-HT1AR、5-HT1BR、5-HT1CR、5-HT1DR、5-HT1ER和5-HT1FR等6种亚型。这些受体都属于G蛋白偶联受体，有7个α螺旋形成的跨膜结构域，受体被激活并与Gi/o相耦联，被激活后会抑制腺苷酸环化酶进而抑制cAMP产生，进而影响其下游各种生理功能。功能上的重要性使得该家族成员成为重要的药物作用靶点，也成为各大药物公司研发的重点，有着潜在的极高的科研和市场价值。

5-HT1BR是5-HT1受体中的一个重要亚型。5-HT1BR含有390个氨基酸,分子量为43500,由1170个碱基对组成其基因编码。广泛分布于中枢神经系统、前脑皮层、基底节、纹状体和海马区，受体的功能根据其定位的不同而不同。在前脑皮层，可以抑制多巴胺的释放，在基底节和纹状体，5HT1BR作为自身受体，抑制五羟色胺的释放，通过降低微兴奋性突触后电位的频率降低谷氨酸的传送，在抑郁，焦虑，偏头痛等疾病中起重要作用。

通常情况下，5-HT1BR主要定位在突触前膜，为自身受体，抑制5-HT的释放，影响神经元的兴奋性和突触的传递，是治疗神经系统紊乱药物的理想靶标。目前这方面的研究尚处于起步阶段，以5-HT1BR为特异性靶点的药物激动剂Sumtriptan(舒马曲坦)已被用于临床治疗偏头痛。大量的动物实验及临床前研究表明5-HT1BR在抑郁，焦虑，偏头痛等生理及病理过程中发挥重要作用。所以建立这样一种药物筛选模型，不仅为5-HT1BR的基础研究提供一种更为便捷的途径，更为重要的是提供了一种更为高效、便捷的药物筛选方式，丰富抗抑郁和偏头痛药物市场，为人们提供更多选择。