[发明专利]一种建立农杆菌介导香鳞毛蕨配子体遗传转化体系的方法

权利要求书

1.一种建立农杆菌介导香鳞毛蕨配子体遗传转化体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)预培养：将香鳞毛蕨配子体置于培养基上进行预培养，预培养时间为2天；

2)农杆菌菌液的制备：用植物双元表达载体转化农杆菌，然后将含有植物双元表达载体的农杆菌扩大培养后收集菌体，重悬后获得农杆菌菌液,所述农杆菌菌液的OD₆₀₀＝0.5；

3)农杆菌菌液的浸染；将步骤1)中经过预培养的香鳞毛蕨配子体浸泡于步骤2)获得的农杆菌菌液中进行侵染，侵染时间为10min；

4)菌和延迟培养：除菌后进行延迟培养，所述除菌是将经过农杆菌浸染后的配子体用200mg/L-500mg/L的头孢霉素无菌水清洗后，接种到含有300mg/L头孢霉素的培养基上；所述延迟培养的时间为15d；

5)检测筛选：最后对目标基因进行检测，筛选后得到具有可遗传目标基因的香鳞毛蕨植株；所述筛选是在含有300mg/L头孢霉素和200mg/L卡那霉素的培养基上筛选30d。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述植物双元表达载体上质粒携带有GUS报告基因，CaMV启动子和筛选标记基因。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述植物双元表达载体为PBI 121。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)预培养：将香鳞毛蕨配子体置于培养基上进行预培养2d；

2)农杆菌菌液的制备：用载体PBI 121转化农杆菌LB4404，然后将含有PBI 121载体的农杆菌LB4404扩大培养后收集菌体，重悬后使OD₆₀₀为0.5，获得农杆菌菌液；

3)农杆菌菌液的浸染；将步骤1)中经过预培养的香鳞毛蕨配子体浸泡于步骤2)获得的农杆菌菌液中进行侵染10min；

4)将经过农杆菌浸染后的配子体用200mg/L-500mg/L的头孢霉素无菌水清洗后，接种到含有300mg/L头孢霉素的培养基上，然后进行延迟培养15d；

5)最后对GUS基因进行检测，在含有300mg/L头孢霉素和200mg/L卡那霉素的培养基上筛选30d，得到具有可遗传目标基因的香鳞毛蕨植株。