[发明专利]一种锥栗离体培养植株再生的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物繁殖技术领域，涉及一种锥栗离体培养植株再生的方法。

背景技术

锥栗（Castanea henryi (Skam) Rehd. et Wils.），壳斗科栗属，别名：锥栗、尖栗、箭栗，旋栗，棒栗等，落叶乔木，高达30米，胸径达1米。叶互生，卵状披针形，长8-17厘米，宽2-5厘米，顶端长渐尖，基圆形，叶缘锯齿具芒尖。雄花序生小枝下部叶腋，雌花序生小枝上部叶腋。壳斗球形，带刺直径2-3.5厘米；坚果单生于壳斗，卵圆形。花期5-7月，果期9-10月。广布于中国秦岭南坡以南、五岭以北各地，生于海拔100-1800米的丘陵与山地，常见于落叶或常绿的混交林中。锥栗喜光，耐旱，要求排水良好。病虫害少，生长较快。锥栗是中国重要木本粮食植物之一。果实可制成栗粉或罐头。木材可供枕木、建筑等用。组织培养能通过无性繁殖，遗传树种的优良特性，能在短时间内快速繁殖获得大量优质的组培苗，为优质种源推广提供可能。

发明内容

本发明的目的是针对锥栗组织培养过程中芽增殖系数低，生长缓慢等问题,提供一种生长效果好、扩繁快的锥栗嫩枝组培繁殖方法。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

一种锥栗离体培养植株再生的方法，包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生锥栗嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3-4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，具体操作步骤如下：

（1）外植体选择：采集半木质化、生长健壮的当年生锥栗嫩枝作为外植体；

（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10-15 min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度 0.1%的升汞溶液中，控制浸泡时间15-20 min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；

（3）初始芽诱导培养：将步骤（2）得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，培养30-35 d，初始芽萌发、生长；

（4）增殖培养：将高≥1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，35-40 d转接一次，循环往复，经3-4个周期的培养，形成丛生芽；

（5）壮芽培养：将步骤（4）得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，培养35-40 d，形成壮芽；

（6）生根培养：将步骤（5）得到的高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于步骤（4）的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤（5），循环往复，获得大量壮芽。

以上所述的初始芽诱导培养基的配方为：1/2改良MS培养基+6-BA 4.0-6.0 mg/L+IBA 2.0-3.0 mg/L+KT 1.0-2.0 mg/L+ZT 1.5-2.0 mg/L+ VC 15 mg/L+叶酸10mg/L+VB₂ 15 mg/+琼脂3.0 g/L+葡萄糖25 g/L。

以上所述的增殖培养基的配方为：改良1/2MS培养基+6-BA 6.0-8.0 mg/L+IBA 2.0-3.0 mg/L+ZT 0.5-1.0 mg/L+VC 15 mg/L+VB₂ 15 mg+L-半胱氨酸 20 mg/L+琼脂 3.6 g/L+葡萄糖 30 g/L。

以上所述的壮芽培养基的配方为：改良MS培养基+6-BA 3.0-4.0 mg/L+IBA 1.0-1.5 mg/L+VC 15 mg/L+VB₂ 15 mg+L-半胱氨酸 20 mg/L+琼脂 3.5 g/L+葡萄糖 25 g/L。

以上所述的生根培养基的配方为：1/2改良MS培养基+6-BA 1.5-2.5 mg/L+IBA 1.0-1.5 mg/L+琼脂 3.5 g/L+葡萄糖 30 g/L。