[发明专利]一种适配体筛选用多腔室微流控PCR芯片及其制造方法与应用

说明书

本发明公开一种适配体筛选用多腔室微流控PCR芯片，该多腔室微流控PCR芯片包括微流PCR反应片、温度循环加热板、玻璃基底、芯片夹具，所述PDMS反应片上反应液注入孔、Z型混合单元、流入微流通道、PCR扩增室、流出微流通道、反应液流出孔依次联通。该微流控PCR芯片采用多个反应腔室，可保证次级文库的高质、足量获取及核酸种类多样性；该微流控PCR芯片通过荧光实时扩增曲线可以快速获取最优扩增条件，将适配体筛选的核酸序列进行最优条件下扩增。本发明还公开了利用多腔室微流控PCR芯片适筛选配体的方法，该方法可以用于各类靶标适配体筛选的PCR扩增，为其他适配体筛选工作者提供了很好的思路设计和参考。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种适配体筛选用多腔室微流控PCR芯片及扩增方法。

背景技术

适配体具有与抗体相类似的性质，但是在许多方面还体现出了优于抗体的特点：(1)特异性更强；(2)更容易获得；(3)可以针对不同种类的目标靶分子进行筛选，拓宽应用范围；(4)无免疫原性，可在体内反复使用；(5)稳定性优于抗体，利于储存。正是基于适配体的各种优点，适配体在分析、临床、环境、分子识别及药物筛选等方面都显示出了广阔的应用前景。因此，适配体筛选技术的进步直接影响了适配体的有效获取和应用。

在适配体筛选过程中，PCR扩增技术作为一个关键环节尤为重要，通过PCR技术可以成千上万倍的扩大筛选后的文库的库容量，保证下一轮筛选的顺利进行，因此，对适配体筛选中PCR扩增方法的研究具有重要的意义。目前，适配体筛选中的PCR扩增方法依然采用固定轮数扩增，对扩增结果没有定量的监控，这就导致了经分离后的次级文库的库容量、文库的质量均不相同。近几年一些科学工作者开始重视扩增轮数的优化问题，但采用的是离线的扩增条件优化方法，其方法琐碎、复杂，不利于加速筛选流程。发展一种更加简单、快速的微流控PCR芯片扩增方法十分重要。实时快速观察PCR扩增的最优条件，控制扩增产物的库容量，保证次级文库的优质性、一致性对于适配体筛选的成功具有重要影响。本发明方法优化了PCR扩增优化过程使得整个适配体筛选过程更加简单化、快速化。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种适配体筛选用多腔室微流控PCR芯片及扩增方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种适配体筛选用多腔室微流控PCR芯片，该多腔室微流控PCR芯片包括微流PCR反应片、温度循环加热板、玻璃基底、芯片夹具，所述PDMS反应片上设有反应液注入孔、Z型混合单元、流入微流通道、PCR反应池、流出微流通道、反应液流出孔，所述反应液注入孔、Z型混合单元、流入微流通道、PCR扩增室、流出微流通道、反应液流出孔依次联通。

作为优选，所述微流PCR反应片置于玻璃基底上，所述玻璃基底置于温度循环加热板上。

作为优选，所述芯片夹具通过固定螺丝与温度循环加热板连接。

作为优选，所述PCR反应池的数量为2～16个。

上述适配体筛选用多腔室微流控PCR芯片的制造方法，包括如下步骤：

(1)利用打印机打印微流控PCR芯片的基体；

(2)微流控PCR芯片的基体通过紫外曝光后将图形转移至涂有感光胶的镉板上通过湿法刻蚀制备微流控通道模板；

(3)将PDMS前聚体与固化剂按照质量比为5：1～20：1的比例混合均匀后，将其放入真空干燥器中，除气泡，再浇到微流控通道模板上，经固化后得到2～6mm厚的PDMS微流控通道；

(4)用4～10mm打孔器在微流控通道模板上打孔，得到扩增反应腔室，再用等离子处理，得到微流PCR反应片；

(5)将玻璃片紧密贴合在微流控通道模板上，得到微流控PCR芯片。