[发明专利]一种适配体筛选用多腔室微流控PCR芯片及其制造方法与应用

权利要求书

1.利用多腔室微流控PCR芯片适筛选配体的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)微流控PCR芯片准备：向微流控PCR芯片通入5~20 mg/mL BSA 和 0.01~0.5 mM 随机序列短链ssDNA，在25~40 ℃条件下封闭1~3 h，之后用500 μL 1× PBST溶液清洗通道，最后用高纯氮气吹干备用；

(2) 扩增样品制备：将适配体筛选产物75 μL与300 μL2× SYBRPremix Ex Taq^TM 酶，12 μL、20 μM TAMRA标记的前向引物和 12 μL、20 μM 生物素化的后向引物及 216 μL 超纯水混合通过注射泵经反应液注入孔在Z型混合通道中混合后平均分配至2~16个PCR反应池，最后每个PCR反应池中加入10~100 μL的矿物油防止溶剂挥发；

(3) PCR扩增过程：将步骤(2)制备好的微流控PCR芯片放置于温度循环平板加热板上进行PCR扩增；扩增程序设置如下：95 ℃ 30 s~150 s，10~30 轮循环：95 ℃ 30 s，60.5 ℃30 s， 72 ℃ 30 s，使用小型荧光探头直接置于反应池上方5~25 mm采集反应池的荧光信号；

其中，所述微流控PCR芯片包括微流控PCR反应片、温度循环加热板、玻璃基底、芯片夹具，所述微流控PCR反应片上设有反应液注入孔、Z型混合通道、流入微流通道、PCR反应池、流出微流通道、反应液流出孔，所述反应液注入孔、Z型混合单元、流入微流通道、PCR反应池、流出微流通道、反应液流出孔依次联通；

所述微流控PCR反应片置于玻璃基底上，所述玻璃基底置于温度循环加热板上；

所述芯片夹具通过固定螺丝与温度循环加热板连接；

所述PCR反应池的数量为2~16个。

2.根据权利要求1所述利用多腔室微流控PCR芯片适筛选配体的方法，其特征在于，所述微流控PCR芯片的制造方法包括如下步骤：

(1) 利用打印机打印微流控PCR芯片的基体；

(2) 微流控PCR芯片的基体通过紫外曝光后将图形转移至涂有感光胶的镉板上通过湿法刻蚀制备微流控通道模板；

(3) 将PDMS前聚体与固化剂按照质量比为5：1~20：1的比例混合均匀后，将其放入真空干燥器中，除气泡，再浇到微流控通道模板上，经固化后得到2~6 mm厚的PDMS微流控通道；

(4) 用4~10 mm打孔器在微流控通道模板上打孔，得到PCR反应池，反应池的直径为4~10 mm，再用等离子亲水化处理，得到微流控PCR反应片；

(5) 将玻璃片紧密贴合在微流控通道模板上，得到微流控PCR芯片。