[发明专利]一种离心式固相酶切柱及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种离心式的固相酶切柱，其特征在于该固相酶切柱包括一个离心柱组件及装填在其中的固定有蛋白酶的填料。

2.根据权利要求1所描述的离心柱组件，其特征在于包含一个离心柱以及一个离心柱套管。

3.根据权利要求2描述的离心柱，其特征在于离心柱柱管包括柱体、上盖、筛板、密封圈和下堵头。

4.根据权利要求3描述的离心柱柱管，其特征在于，柱管材料包括但不限于聚丙烯，聚苯乙烯，高密度聚乙烯等，其中优选聚丙烯材料。

5.根据权利要求3所描述的离心柱筛板，其特征在于，筛板材料包括但不限于聚丙烯，混合纤维或者超高分子量聚乙烯，其中优选超高分子量聚乙烯。

6.根据权利要求3所描述的离心柱筛板，其特征在于筛板孔径在1-200μm之间，其中优选5-100μm。

7.根据权利要求3所描述的密封圈，其特征在于密封圈外径与离心柱柱体内径一致，或稍大于柱体内径，以保证密封效果。

8.根据权利要求3所描述的下堵头，其特征在于下堵头为一个帽型设计，下堵头的内径与柱体出口的外径一致以保证密封效果。

9.根据权利要求3所描述的离心柱上盖，其特征在于上盖与柱体连为一体，且上盖规格与柱体进液口相匹配，盖上上盖后不会有液体漏出。

10.根据权利要求2所描述的离心柱套管，其特征在于，离心柱套管的材质包括但不限于聚丙烯，聚苯乙烯，高密度聚乙烯等，其中优选聚丙烯。

11.根据权利要求2所描述的离心柱组件，离心柱套管的内径小于柱体最粗处的外径，以保证离心时，离心柱不会陷入离心柱套管内。

12.根据权利要求1所描述的固相酶切柱填料，其特征在于填料为固定有蛋白酶的固相填料。

13.根据权利要求12所描述的固相填料，其特征在于，该固相填料包括但不限于琼脂糖凝胶、交联琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶、纤维素及合成固相材料。

14.根据权利要求13所描述的合成固相材料，其特征在于，该固相材料包括但不限于聚苯乙烯、高分子聚苯乙烯及聚丙烯材料。

15.根据权利要求12所描述的蛋白酶，其特征在于，蛋白酶包括但不限于胰蛋白酶、碱性蛋白酶、糜蛋白酶及胃蛋白酶。

16.根据权利要求12固相酶切柱填料，其特征在于蛋白酶通过共价偶联的方法固定在固相载体上。

17.一种离心式固相酶切柱的制备方法，其特征在于该固相酶切柱制备方法如下

选择N-羟基琥珀酰亚胺修饰的载体，将载体干粉用1mmol/L的盐酸浸泡过夜进行活化

每克活化的载体加入30-200nmol的蛋白酶，在0.1M NaHCO₃，0.5M NaCl PH8.3的缓冲液中，室温偶联2小时；或者4℃偶联过夜

偶联产物用1M Tris.HCl PH 8.0 室温反应2小时

偶联好的载体-蛋白酶复合物，用20mM PH7.4的PBS洗涤

在离心柱柱管中装入筛板，并用装柱工具将筛板压到底部

将偶联好的载体-蛋白酶复合物装入柱管中

在载体-蛋白酶复合物上方再加入一块筛板，并压紧

用含有0.01%硫柳汞的10mM PBS PH7.4 洗涤蛋白酶-载体偶联产物，放于4℃保存。

18.一种用于离心式固相酶切柱的应用，其特征在于，通过该固相酶切柱，可以方便的进行蛋白质的酶切反应及酶切产物的分离。

19.根据权利要求18所描述的蛋白质的酶切反应，其特征在于，在盖上上盖和下堵头的情况下，可以在离心柱中进行蛋白质的酶切反应。

20.根据权利要求18所描述的蛋白质酶切产物的分离方式，其特征在于，在酶切反应反应结束后，打开下堵头，将离心柱放于离心柱套管，通过离心可以将酶切产物与固定化酶分离。

21.根据权利要求18所描述的蛋白质酶切产物的分离方式，其特征在于，在不堵上下堵头的情况下，可以通过真空负压分离设备，将酶切产物与固定化酶分离，酶切产物收集到负压收集设备中，固定化酶保留在里离心柱内。

22.根据权利要求18所描述的蛋白质酶切产物的分离方式，其特征在于，在不堵下堵头的情况下，可以将普通医用注射器接在离心柱出口实现酶切产物与固定化酶的分离，酶切产物收集到注射器中，而固定化酶保留在离心柱内。