[发明专利]一种鉴定嘎拉苹果后代植株的SSR分子标记IV及其应用

权利要求书

1.一种鉴定嘎拉苹果后代植株的SSR分子标记IV的应用，其特征是包括以下步骤：

（1）以苹果基因组DNA为PCR扩增模板，分别使用SSR分子标记IV的两对引物，进行PCR扩增，反应体系为15μL，其中含10×PCR Buffer 1.5 μL、2.5 mM dNTPs mixture 1.2μL、10ng/μL Primers F 1.5μL、10ng/μL Primers R 1.5μL、5U Taq 聚合酶0.15μL、100ng/μLDNA模板0.75 μL，去离子水补足至15μL；

（2）扩增程序为：94℃预变性2 min 30 s，94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸40s，35个循环，72℃10 min，4℃保存备用；

（3）PCR产物检测，用8%非变性聚丙烯酰胺电泳，将PCR的每个反应产物加入1/2的非变性Loading Buffer，混匀，150V恒定电压150min，冰醋酸固定，AgNO₃ 染色拍照；

（4）用于花药培养植株鉴定时，待测苹果能扩增出上述SSR分子标记IV的两对引物相对应的单独的一条特异性条带，说明待测苹果植株为纯合材料，如出现两条条带，则待测苹果植株不是纯合材料；

所述SSR分子标记IV由LG5 标记Hi04d02、LG10 标记Hi05b02组成，SSR分子标记IV的两对引物在检测过程中同时使用，所述引物的序列为：

LG5 标记Hi04d02：

上游：5^，- TTCGTGGCTGAGAAAGGAGT -3^，

下游：5^，- GTTTGTACGGTGCATTGTGAAAG -3^，

LG10 标记Hi05b02：

上游：5^，- GATGCGGTTTGACTTGCTTC -3^，

下游：5^，- GTTTCTCCAGCTCCCATAGATTGC -3^，。