[发明专利]一种利拉鲁肽的制备方法

权利要求书

1.一种利拉鲁肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用脱保护试剂将Fmoc-Gly-Wang树脂脱保护，去Fmoc保护基团；

(2)将去保护的Fmoc-Gly-Wang树脂与保护氨基酸逐一偶联获得利拉鲁肽主链树脂；其中

第12位～第14位三个保护氨基酸是以保护肽片段X进行偶联；

第20位～第22位三个保护氨基酸是以保护肽片段Y进行偶联；

第31位以Boc-His(trt)-OH保护形式进行偶联；

所述X为Ala-Ala-Lys；所述Y为Val-Ser-Ser；

(3)将利拉鲁肽主链肽树脂脱除赖氨酸侧链的alloc保护，逐一偶联侧链，得到利拉鲁肽肽树脂；

(4)将利拉鲁肽肽树脂在裂解液中裂解，得到利拉鲁肽粗品；

(5)将利拉鲁肽粗品纯化，得到利拉鲁肽精品；

所述步骤(2)的偶联反应中加入活化剂，所述活化剂为1-羟基苯并三唑或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑；

接入X对应的保护肽片段为Fmoc-Ala-Ala-Lys(alloc)-OH；接入Y对应的保护肽片段为Fmoc-Val-Ser(tbu)-Ser(tbu)-OH；Fmoc-Gly-Wang树脂与保护氨基酸和保护肽片段偶联时，先反应得到的保护氨基酸树脂脱去Fmoc保护基后再与下一个保护氨基酸偶联反应；

所述Fmoc-Gly-Wang树脂的取代度≤0.35mmol/g；

其偶联氨基酸片段为：

Boc-His(trt)-Ala-Glu(otbu)-Gly-Thr(tbu)-Phe-Thr(tbu)-Ser(tbu)-Asp(otbu)-Y(tbu)-Tyr(tbu)-Leu-Glu(otbu)-Gly-Gln(trt)-X(alloc)-Glu(otbu)-Phe-Ile-Ala-Trp(boc)-Leu-Val-Arg(pbf)-Gly-Arg(pbf)-Gly-Wang树脂，

其中X为Ala-Ala-Lys；Y为Val-Ser-Ser。

2.如权利要求1所述的一种利拉鲁肽的制备方法，其特征在于,所述步骤(1)的脱保护试剂为哌啶/DMF溶液，哌啶占所述脱保护试剂的体积百分比为30～50％；所述脱保护的反应温度为10～25℃。

3.如权利要求1所述的一种利拉鲁肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中选用的偶联试剂为N,N-二异丙基碳二亚胺、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐，O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯中的一种。

4.如权利要求1所述的一种利拉鲁肽的制备方法，其特征在于，所述偶联过程中保护氨基酸或保护肽片段的用量为树脂总摩尔量的2倍～6倍。

5.如权利要求1所述的一种利拉鲁肽的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，脱除赖氨酸侧链的alloc保护基的试剂为四三苯甲磷钯和吗啉/THF混合溶液。

6.如权利要求1所述的一种利拉鲁肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，裂解液含有三氟醋酸体积占比为80％～95％、1,2-乙二硫醇体积占比为1％～10％、三异丙基硅烷体积占比为1％～5％，溶剂为水。