[发明专利]一种α‑gal表位修饰试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种α-gal表位修饰试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的组分包括：MES溶液，UDP-gal溶液，α1,3-GT酶液，NA溶液，FITC-Lectin溶液和生理盐水。

2.根据权利要求1所述的一种α-gal表位修饰试剂盒，其特征在于，所述MES溶液为包含等摩尔比的MuCl₂和MES的混合溶液。

3.一种如权利要求1-2的α-gal表位修饰试剂盒在制备抗肿瘤疫苗中的应用。

4.一种α-gal疫苗，其特征在于，所述α-gal疫苗是利用如权利要求1-2的α-gal表位修饰试剂盒对肿瘤细胞进行标记制备获得的。

5.根据权利要求4所述的一种α-gal疫苗，其特征在于，所述α-gal疫苗的制备方法包括以下步骤：

(1)将肿瘤细胞、MES、UDP-gal、α1,3-GT和NA混合于生理盐水中，置于37℃下孵育反应3小时，然后离心去除上清，获得反应细胞，孵育期间多次摇匀细胞，防止细胞沉淀；

(2)将反应细胞用生理盐水重悬，加入FITC-Lectin进行荧光标记，充分混匀后，置于室温下避光放置30min，然后上流式细胞仪检测；同时，以未反应的细胞为完全阴性，未反应的加FITC-Lectin的细胞为对照阴性；

(3)若检测结果正确，则说明步骤(1)反应成功，步骤(1)获得的反应细胞即为α-gal阳性细胞；

(4)将α-gal阳性细胞进行灭活处理，制成α-gal疫苗。

6.根据权利要求5所述的一种α-gal疫苗，其特征在于，所述步骤(1)中，肿瘤细胞、MES、UDP-gal、α1,3-GT和NA混合于生理盐水中的终浓度依次为1×10⁴-7×10⁴个/μl，25mmol/L、0.3-3mmol/L、0.02-2μg/μl和≥1unit/mg，所述步骤(2)中，FITC-Lectin加入的终浓度为≥0.002μg/μl。

7.根据权利要求5所述的一种α-gal疫苗，其特征在于，所述步骤(4)中，灭活处理的方法为利用液氮反复冻融肿瘤细胞进行灭活。

8.根据权利要求5所述的一种α-gal疫苗，其特征在于，所述步骤(4)中，灭活处理的方法为放射性照射灭活。

9.根据权利要求5所述的一种α-gal疫苗，其特征在于，所述步骤(4)中，灭活处理的方法为用药物处理进行灭活。