[发明专利]一种基于双抗体夹心法检测雌酚和双酚A的方法

权利要求书

1.一种基于双抗体夹心法检测雌酚和双酚A的方法，包括以下步骤：

1)纳米金-巯基乙酸-己烷雌酚单克隆抗体修饰的电化学免疫传感器的制备：先将纳米金颗粒通过电化学还原法沉积到处理好的玻碳电极表面，然后通过自组装法将巯基乙酸修饰到纳米金颗粒表面，最后采用活化羧基法将己烷雌酚单克隆抗体偶联到电极表面修饰的纳米金颗粒上，制得电化学免疫传感器；

2)标准溶液的配制：配制含有雌酚或双酚A的磷酸缓冲溶液，作为标准溶液，将含有浓度为0的雌酚或双酚A的标准溶液作为空白标样；

3)工作曲线的建立：首先将步骤1)所述电化学免疫传感器浸入步骤2)所述标准溶液中孵育，孵育后用磷酸缓冲溶液冲洗电化学免疫传感器，然后将其浸入含有0.5mg/L的己烷雌酚单克隆抗体的溶液中进行孵育，之后以磷酸缓冲溶液冲洗，再将其在K₃[Fe(CN)₆]溶液中进行差分脉冲伏安扫描，记录其响应电流；空白标样对应的响应电流记为I₀，含有雌酚或双酚A标样的响应电流记为I_x，响应电流的变化值ΔI等于I_x与I₀之差的绝对值；将所述ΔI与标准溶液中雌酚或双酚A浓度的对数值lgC绘制成ΔI-lgC工作曲线，采用线性回归法得到ΔI-lgC线性回归方程；

4)雌酚和双酚A的测定：配置含有待测样品的磷酸缓冲溶液，按照与步骤3)相同的方法对所述免疫传感器进行孵育和差分脉冲伏安扫描，记录响应电流；根据响应电流的变化值ΔI和ΔI-lgC线性回归方程，得到雌酚和双酚A的含量。

2.根据权利要求1所述的一种基于双抗体夹心法检测雌酚和双酚A的方法，其特征在于，所述纳米金-巯基乙酸-己烷雌酚单克隆抗体修饰的电化学免疫传感器采用以下方法制备：首先将清洁干净的玻碳电极浸入质量百分浓度为0.5％的氯金酸溶液中，采用恒电位法将氯金酸还原为纳米金颗粒从而沉积于玻碳电极表面；然后将玻碳电极置于1mmol/L的巯基乙酸水溶液中，通过自组装的方法在纳米金颗粒表面修饰巯基乙酸；再将玻碳电极置于含有0.1mol/L的N-溴代琥珀酰亚胺和0.1mol/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液中，活化羧基；在上述活化羧基后的玻碳电极表面滴涂质量浓度为0.5mg/L的己烷雌酚单克隆抗体，4℃条件下反应，制得所述的纳米金-巯基乙酸-己烷雌酚单克隆抗体修饰的电化学免疫传感器。

3.根据权利要求1所述的一种基于双抗体夹心法检测雌酚和双酚A的方法，其特征在于，所述雌酚分别为己烯雌酚、己烷雌酚和己二烯雌酚。

4.根据权利要求1所述的一种基于双抗体夹心法检测雌酚和双酚A的方法，其特征在于，以所述空白标样的测定值标准偏差的3倍作为样品检测限，重复步骤3)可得出雌酚或双酚A样品的检测限。

5.一种基于双抗体夹心法检测雌酚和双酚A的方法在食品、土壤、水质、塑料中的应用。