[发明专利]一种从蛹虫草培养基中提取及连续富集多糖的方法

权利要求书

1.一种从蛹虫草培养基中提取及连续富集多糖的方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤一：蛹虫草发酵残余培养基干燥：将蛹虫草大米培养基切成片状，在真空干燥箱中70-100℃下分别烘干2-4次，每次1.5-3h，制取蛹虫草发酵残余培养基，含水量为≤5%；

步骤二：超微粉碎：将步骤一制取的蛹虫草大米培养基切片粉碎，过100目筛，得到蛹虫草大米培养基粗粉，不同粒度的蛹虫草大米培养基粉经分离后分别进入初级收集器和二级收集器，得到气流粉碎一级、二级分离物和气流粉碎一级分离物；

将已经制备好的气流粉碎一级分离物放入行星球磨罐，采用物料和研磨球1:1-1:3的比例进行行星球磨粉碎1-3h，共粉碎2-3次（粉碎时间合计不超过6h），得到粒度均匀的蛹虫草大米培养基超微粉，粒度分布为20-60μm，粉末含量≤3%；

步骤三：生物多酶体系酶法水解:将步骤二得到的培养基超微粉中加入比例为10-30倍的水后，先在60-100℃下浸提1-4h，然后加入纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶；将上述预浸提后的浸提液用HCl或者NaOH调节pH至6.0-7.5，并将温度调节至35-45℃，搅拌酶解2-6h后，将pH调节至中性，并于90-95℃下灭酶3-6min，冷却至室温；

步骤四：离心过滤，回流控制：制取蛹虫草多糖；

步骤五：多功能膜浓缩富集：

A、将步骤四得到的蛹虫草多糖提取液利用陶瓷膜设备进行活性富集；

B、使用0.1-0.45μm膜微滤，以除去A步骤连续压滤后少量的悬浮固形物和小颗粒物质，料液温度为30-60℃，pH 6-8之间，操作压力0.1-0.4MPa，微滤时间0.5-3.5h，收集微滤液待用；

C、将微滤液置于多功能超滤设备储液桶中，有机膜超滤；

D、得到的截留液再用0.1-0.45μm的微滤膜进行浓缩富集0.5-3.5h，且多糖分子量分布处于30-250 KDa的活性范围；

步骤六：喷雾干燥：制取集蛹虫草多糖超微粉。

2.根据权利要求1所述的一种从蛹虫草发酵残余培养基中提取、富集、精制虫草多糖的方法，其特征在于：所述步骤三中纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶，三种酶的比例为1:1:1，且添加量为提取体系重量的0.03%-0.20%（m/v）。

3.根据权利要求1所述的一种从蛹虫草发酵残余培养基中提取、富集、精制虫草多糖的方法，其特征在于：所述步骤五步骤为：将上述得到的含有沉淀的提取液进行过滤，并将滤液在3000 -5000r/min的速度下利用立式自动刮刀下部卸料离心机离心10-30min，得到含有蛹虫草多糖的上清提取液;将得到的沉淀加入比例为5-15倍的水，按照生物多酶体系酶法水提步骤中酶用量、用法再提取1-2次。

4.根据权利要求1所述的一种从蛹虫草发酵残余培养基中提取、富集、精制虫草多糖的方法，其特征在于：所述有机膜超滤截留分子量为（MwCO）为30-300 KDa，所述超滤压力选择为0.1-0.4MPa，pH 6-8之间，微滤时间0.5-3.0h。

5.根据权利要求1所述的一种从蛹虫草发酵残余培养基中提取、富集、精制虫草多糖的方法，其特征在于：将步骤五B中收集的微滤液用超滤膜联合微滤膜浓缩的方式，浓缩倍数达到原来的5-15倍，得到蛹虫草多糖浓缩液。

6.根据权利要求1所述的一种从蛹虫草发酵残余培养基中提取、富集、精制虫草多糖的方法，其特征在于：步骤六步骤为：喷雾干燥设备入口温度为150-190℃，出口温度为60-100℃。