[发明专利]抗生素pyrazolofluostatin A-C及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了抗生素pyrazolofluostatin A‑C及其制备方法和应用。pyrazolofluostatins A–C，结构式如式(I)所示，其是由小单孢菌(Micromonospora rosaria)SCSIO N160发酵产生，Pyrazolofluostatin A‑C是具有吡唑环结构的新颖的fluostatins家族化合物。吡唑环是一个重要的药理活性基团，进一步对pyrazolofluostatins A–C进行活性筛选，有望成为药物先导小分子。。

技术领域：

本发明属于工业微生物领域，具体涉及新的抗生素pyrazolofluostatin A-C及其制备方法和应用。

背景技术：

Fluostatins是一类非典型角环素类化合物，这一家族的化合物结构多样，具有抗菌、抗肿瘤、蛋白酶抑制等多种生物活性。Pyrazolofluostatin A-C是具有吡唑环结构的新颖的fluostatins家族化合物。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供三种新的非典型角环素pyrazolofluostatins A-C。

本发明的三种新的非典型角环素pyrazolofluostatin A-C，其结构如式(I)所示：

化合物1为pyrazolofluostatin A，R₁为OH，C1为R构型，R₂为OH，C2为S构型，R₃为OH，C3为S构型；化合物2为pyrazolofluostatin B，R₁为OH，C1为R构型，R₂为OH，C2为R构型，R₃为OH，C3为S构型；化合物3为pyrazolofluostatin C，R₁为OH，C1为R构型，R₂为OH，C2为R构型，R₃为H，C3为S构型。

本发明的第二个目的是提供一种制备抗生素pyrazolofluostatin A-C的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)制备小单孢菌(Micromonospora rosaria)SCSIO N160的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离开，发酵液经大孔树脂吸附，后用丙酮洗脱大孔树脂，洗脱液回收丙酮后剩余的水混合液用丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏A；菌丝体先用丙酮浸提，浸取液回收丙酮后剩余的水混合液再用丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏B；

b)将浸膏A和浸膏B合并的粗提物经硅胶柱层析，用氯仿/甲醇作为洗脱剂，从体积比100：0～0：100进行梯度洗脱，收集氯仿/甲醇体积比50:50梯度洗脱下来的馏分Fr.4，后经LH-20凝胶柱，以氯仿/甲醇体积比1:1作为流动相洗脱，洗脱馏分再经HPLC制备分离，得到化合物pyrazolofluostatin A-C。

所述的a步骤的制备小单孢菌(Micromonospora rosaria)SCSIO N160的发酵培养物是通过以下方法制备：将活化的小单孢菌(Micromonospora rosaria)SCSIO N160接入种子培养基，28℃，200rpm，培养144h得种子液，将种子液以10％的接种量接入到发酵培养基中，28℃，200rpm，振荡培养120h，而制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方都为每升培养基中含有：淀粉10g，葡萄糖20g，酵母粉10g，玉米粉3g，牛肉膏3g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，K₂HPO₄ 0.5g，CaCO₃ 2g，余量为海盐质量分数为3％的海水或陈海水。