[发明专利]苯并菲啶类生物碱分子印迹磁性微球的制备方法及应用

权利要求书

1.利用分子印迹聚合物磁性微球分离苯并菲啶类生物碱的方法，其特征是采用了以下操作步骤：

A：Fe₃O₄纳米颗粒制备

将1.08g FeCl₃•6H₂O超声分散于80mL乙二醇中，随后在溶液中依次加入0.5g柠檬酸三钠，1gPEG-2000，超声分散；最后，加入4.5g的无水乙酸钠，搅拌溶液至澄清透明后，将溶液转移至100ml反应釜，于200℃下反应8h；磁分离后，利用水和无水乙醇交替洗三次；冷冻干燥后，得Fe₃O₄纳米颗粒；

B：Fe₃O₄@SiO₂颗粒制备

将0.25g Fe₃O₄颗粒加入乙醇-水的混合溶液中，其中无水乙醇和水的体积比为160mL无水乙醇/40mL水，超声分散30min；将所得溶液转移至250mL三口瓶中，500r/min搅拌15min后，加入5mL氨水，搅拌10min后，滴加0.6ml正硅酸乙酯；该混合物于40℃，500r/min下反应12h，磁分离，无水乙醇与水交替洗三次后，冷冻干燥得Fe₃O₄@SiO₂纳米颗粒；

C：Vinyl- Fe₃O₄@SiO₂颗粒制备

将250ul甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷滴加到55mL含有10%醋酸的醋酸-水混合溶液中，其中醋酸-水混合溶液中含水50mL和冰醋酸5mL，于25℃，700r/min下搅拌5h；随后，加入0.34g Fe₃O₄@SiO₂纳米颗粒于溶液中，60℃，700r/min下搅拌5.5h；磁分离，无水乙醇与水交替洗三次后，冷冻干燥得Vinyl-Fe₃O₄@SiO₂纳米颗粒；

D：苯并菲啶类生物碱表面分子印迹聚合物的合成

将0.03g血根碱或白屈菜红碱和0.1ml功能单体4-乙烯吡啶加入到50 mL的乙腈中，在4℃下放置12 h形成预组装溶液，50 mg Vinyl- Fe₃O₄@SiO₂超声分散在10 mL乙腈中，随后加入947ul交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯，0.2g引发剂偶氮二异丁腈和预组装溶液；氮气保护下，在60℃，500r/min下搅拌24h；最后，产物磁分离后，用乙腈洗至上清液澄清,再用甲醇和醋酸的混合液洗脱直至模板除去，用甲醇将粒子洗至中性后冷冻干燥；其中甲醇和醋酸的混合液中甲醇和醋酸的体积比为90：10；

所述的苯并菲啶类生物碱为血根碱或白屈菜红碱；

E：吸附实验

1) 博落回提取液的制备：取博落回果荚200g，用90℃的1 %盐酸水5倍量渗漉提取3次，每次1 h；固液分离后，滤液稀释3倍，作为提取液备用；

2) 提取液中血根碱与白屈菜红碱的分离纯化：在提取液中加入10g的血根碱表面分子印磁性印迹聚合物微球，充分震荡30min后，静置30min,再用强磁铁插入提取液，将血根碱表面分子印磁性迹聚合物微球吸附出来，再将微球放直径1cm的层析柱中，以2%盐酸的酸性甲醇100mL连续缓慢洗脱2次，再将洗脱液浓缩后重结晶处理即得98%的血根碱1.1g；将10g白屈菜红碱表面分子印磁性印迹聚合物微球重新加入到除去血根碱后的提取液，同样的方法操作即得98%的白屈菜红碱0.5g。