[发明专利]拟缺香茶菜酮在制备细胞冻存液的应用和方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种拟缺香茶菜酮在制备细胞冻存液的应用和方法，属于生物领域，特别是细胞培养领域。

背景技术

拟缺香茶菜 Isodon excisoides (Sun ex C. H. Hu) C. Y. Wu et H. W. Li 别名野紫苏，为唇形科（Labiatae）香茶菜属 Rabdosia (Bl.) Hassk.植物，产于湖北、四川、云南。其味辛、苦，性平，具祛风活血、解毒消肿功效，主要用于治疗感冒头痛、风湿痹痛、跌打瘀肿、骨折、外伤出血、毒蛇咬伤。关于该植物化学成分研究报道较少。李火云等对拟缺香茶菜 Isodon excisoides 全草的化学成分进行研究，分离得到 24 个化合物，其中化合物1鉴定为：

(E)-5-hydroxy-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-5-(4-hydroxyphenyl) pent-1-en-3-one，该化合物 为新化合物，命名为拟缺香茶菜酮。其分子结构为：

。

本发明发现拟缺香茶菜酮在制备细胞冻存液的应用和方法，其适用于免疫细胞长期保存，并能够在复苏后保持其细胞特性。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种拟缺香茶菜酮在制备细胞冻存液的应用和方法，其可降低适用于免疫细胞长期保存，并能够在复苏后保持其细胞特性。

拟缺香茶菜酮为：

(E)-5-hydroxy-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-5-(4-hydroxyphenyl) pent-1-en-3-one，其分子结构为：

。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种细胞冻存液。根据本发明实施例，该细胞冻存液冻存的细胞种类不受特别的限制，只要冻存液能用于长期保存细胞即可。

作为本发明的一个技术方案，该冻存液包括0.5体积%的DMSO，0.005-0.008体积%的拟缺香茶菜酮；DMSO是二甲基亚砜， 用途广泛。用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。对皮肤有极强的渗透性，有助于药物向人体渗透。也可作为农药的添加剂。也是一种十分重要的化学试剂。

DMSO也是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。

但研究表明，DMSO存在一定的毒性作用，与蛋白质疏水基团发生作用，导致蛋白质变性，具有血管毒性和肝肾毒性。及余量培养基。因此，从安全角度考虑，应该尽量降低其使用量。

本发明人惊奇的发现，拟缺香茶菜酮可以显著减少DMSO的使用量，该冻存液能够有效用于保存细胞，尤其是免疫细胞，并且冻存时间长（冻存时间可达几年甚至更长），细胞复苏后依然保持良好的细胞活力，活性好，细胞回收率高，尤其适用于大规模免疫细胞的冷冻保存。

本发明的有益之处在于：

本发明公开了一种拟缺香茶菜酮在制备细胞冻存液的应用和方法，其可降低DMSO的用量，降低毒性，增加安全性，而且不需要使用血浆，无传染源，适用于免疫细胞长期保存，并能够在复苏后保持其细胞特性。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1：

分离获得脐带血单个核细胞，将单个核细胞细胞接种到加有20ml培养基的培养瓶中，培养基配比为：18ml OpTmizer™ CTS™ T-cell expansion SFM培养基+2ml自体血浆（Autologous plasma）+终浓度1000IU/ml Pepro Tech IL-2+终浓度0.01KE/ml沙培林（OK432），37℃，5%CO₂无菌培养，记为第0天。每日观察细胞，并进行适当传代扩增，培养基配比为培养基配比为：OpTmizer™ CTS™ T-cell expansion SFM培养基+10%自体血浆（Autologous plasma）+终浓度1000IU/ml Pepro Tech IL-2，诱导扩增得到免疫细胞。

免疫细胞的冻存和复苏方法：