[发明专利]生产醇的方法

权利要求书

1.能够生产至少一种高级醇的微生物细胞，其中所述细胞被遗传修饰以包含至少一种酰基-CoA还原酶(E₁₁)相对于其野生型细胞的增加的表达，且其中所述细胞能够使用乙醇-羧酸发酵生产羧酸和/或其酯。

2.根据权利要求1所述的细胞，其中所述细胞表达至少一种选自以下的酶：醇脱氢酶E₁、乙醛脱氢酶E₂、乙酰乙酰-CoA硫解酶E₃、3-羟基丁酰基-CoA脱氢酶E₄、3-羟基丁酰基-CoA脱水酶E₅、丁酰基-CoA脱氢酶E₆、电子转移黄素蛋白亚基E₇、辅酶A转移酶E₈、乙酸激酶E₉、磷酸转乙酰酶E₁₀。

3.根据权利要求1或2所述的细胞，其中所述细胞来自选自克氏梭菌(Clostridium kluyveri)和食一氧化碳梭菌(C.carboxidivorans)的微生物。

4.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其中酰基-CoA还原酶(E₁₁)能够催化下面的反应1和/或反应2(a)：

反应1：酰基-CoA+2NAD(P)H→脂肪醇

反应2(a)：丁酰基-CoA + NAD(P)H --> 丁醛 + CoA + NAD(P)⁺。

5.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其中E₁₁来自拜氏梭菌(Clostridium beijerinckii)。

6.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其中E₁₁包含与SEQ ID NO:1的60％序列同一性。

7.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述细胞被进一步遗传修饰以包含单官能丁醇-脱氢酶(BDH) (E₁₃)相对于其野生型细胞的增加的表达。

8.根据权利要求7所述的细胞，其中所述细胞被进一步遗传修饰以包含羧酸还原酶(E_12a)、铁氧还蛋白氧化还原酶(AOR) (E_12b)和/或单官能丁醇-脱氢酶(BDH) (E₁₃)相对于其野生型细胞的增加的表达。

9.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述细胞表达氢化酶成熟蛋白和/或电子传递复合体蛋白。

10.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述细胞被遗传修饰以包含至少一种选自以下的酶相对于所述野生型细胞的增加的表达：E₂、E₃、E₄、E₅、E₆、E₇、E₈、E₉、E₁₀、氢化酶成熟蛋白和/或电子传递复合体蛋白。

11.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其中所述高级醇是丁醇和/或己醇。

12.生产高级醇的方法，所述方法包括

(b)使根据权利要求1至11中任一项所述的重组微生物细胞与包含碳源A的培养基接触，其中所述碳源A包含乙醇和/或乙酸。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述方法进一步包括

(a)使产乙酸细胞与包含碳源B的培养基接触以产生碳源A的乙醇和/或乙酸，且所述碳源B包含CO和/或CO₂。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其中所述高级醇选自1-己醇、2-己醇、3-己醇、1-庚醇、2-庚醇、3-庚醇、4-庚醇、辛醇、壬醇、癸醇。

15.根据权利要求1至11中任一项所述的细胞用于生产高级醇的用途。