[发明专利]一种识别HLA‑A2/SLLMWITQC的单域抗体

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤免疫治疗技术领域，特别涉及一种识别HLA-A2/SLLMWITQC的单域抗体。

背景技术

寻找和鉴定肿瘤抗原，一直是肿瘤免疫治疗的一个重要方向。近年发现了大量肿瘤相关抗原和肿瘤特异性抗原，其中以肿瘤-睾丸抗原(cancer-testisantigen，CT)在肿瘤免疫治疗中最具发展潜力。CT抗原具有以下特点：(1)广泛表达于人类多种组织学来源的肿瘤组织中；(2)除睾丸组织和胎盘组织外，在正常组织中几乎不表达；(3)基因定位于X染色体。NY-ESO-1是近年新发现的一种CT抗原，由于具有较强的免疫原性，因而在肿瘤免疫治疗研究中备受瞩目。

NY-ESO-1最初是由Chen(chen YT et al：Cancer J，208-217，2000)等从食道癌的cDNA表达文库中发现的一种具有很强免疫原性的抗原蛋白，此蛋白在多种恶性肿瘤中均有表达，但在正常组织几乎不表达。NY-ESO-1在多种组织类型肿瘤中呈不同程度的表达。通过免疫组织化学染色(immunohistochemistry，IHC)发现，NY-ESO-1蛋白在以下肿瘤中有高的表达频率：神经母细胞瘤(82％)、滑膜肉瘤(80％)、恶性黑色素瘤(46％)和卵巢上皮癌(43％)。RT-PCR检测显示，NY-ESO-1的mRNA在前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、多发性骨髓瘤和肝细胞癌中有较高表达，但其中许多通过IHC检测时，其表达频率较低。也有报道显示，括肺癌、食管癌和子宫癌细胞中NY-ESO-1的表达频率介于20％～40％。

在NY-ESO-1的mRNA呈阳性的恶性黑色素瘤患者中，50％的患者体内存在针对NY-ESO-1的自发性体液免疫反应，而在正常人体内不存在此种免疫反应。另有研究显示，小部分患者的肿瘤外周血中可检测到NY-ESO-1的高亲和力自身抗体。其抗肿瘤机制可能与其氨基酸序列中157-170的表位多肽被人类白细胞抗原HLA-A2分子提呈有关，从而诱导特异性CTC和CD+4、CD+8的免疫应答。基于以上研究，在肿瘤生物治疗方面的研究上，NY-ESO-1抗原又成为研究的热点，尤其作为基因修饰的TCR，CART，TCR样抗体的优势靶点，备受研究者的关注。

NY-ESO-1(157-165，氨基酸序列为SLLMWITQC)是HLA-A2限制型优势表位。以下NY-ESO-1(157-165，氨基酸序列为SLLMWITQC)均简写为HLA-A2/SLLMWITQC。

Robbins研究小组将NY-ESO-1抗原特异性TCR基因修饰的T细胞回输给6名滑膜细胞肉瘤患者和11名恶性黑素瘤患者，结果4名滑膜细胞肉瘤患者和5名恶性黑素瘤患者取得了明显的治疗效果，包括2名完全缓解的患者，而且无一例发生明显的不良反应。

但是也有研究者发现，某些患者的肿瘤仍能逃脱免疫治疗的杀伤。Klippel(Klippel ZK et al：Gene ther，337-342，2014)等发现，接受过继NY-ESO-1特异性T细胞疗法后又复发的恶性黑素瘤患者可能与其体内细胞MHC丢失有关，从而形成了免疫逃逸。此外，Sommermeyer(Sommermeyer D et al：immunol J，6223-6231，2010)等发现不同来源TC R的亲和力和结合力也有差异，尽管自体或异体HLA-A2限制性CTL克隆识别的是相同的NY-ESO-1表位，但是它们的结合能力和功能是有区别的，且CTL克隆的功能和MHCNY-ESO-1-TCR多聚物的结合不相关。他们还发现异体来源的TCR发生脱靶反应的风险更高，这对于TCR基因修饰的T细胞治疗的临床应用具有一定指导意义。

Schuberth等(Schuberth PC et al：Gene ther，386-395，2013)在进行的一项临床前研究中，设计了NY-ESO-1肽157-165特异性的TCR-T细胞，并直接将这些改造后的抗NY-ESO-1-T1-CD28/CD3ζT细胞回输给NY-ESO-1(+)小鼠模型，发现大量IFN-γ等细胞因子的分泌，在体内外均能发挥抗肿瘤效应，对小鼠具有保护作用。