[发明专利]一种双膦酸类药物的检测方法

说明书

本发明提供了一种双膦酸类药物的检测方法，包括：对含双膦酸类药物的待测样品进行预处理，得到预处理后的样品溶液；采用液相色谱‑串联质谱法对所述样品溶液进行检测，得到待测样品中双膦酸类药物的含量，其中，所述液相色谱‑串联质谱法的色谱条件包括：采用五氟苯基柱作为色谱柱，流动相由A相和B相组成，A相为甲酸和甲酸铵的混合水溶液，B相为甲醇。本发明中针对极性强、多级电离、无生色团的双膦酸类药物，运用基于五氟苯基柱的液相色谱‑串联质谱法进行检测，可避免对待测样品的衍生化处理，也可避免在流动相中加入价格昂贵的离子对试剂，能够实现对双膦酸类药物高效、准确的定性、定量检测，解决了双膦酸类药物检测困难的问题。

技术领域

本发明涉及生化分析技术领域，具体涉及一种双膦酸类药物的检测方法。

背景技术

双膦酸盐类药物是一种高效骨吸收抑制剂，临床上用于骨骼上各种相关疾病(如骨质疏松症、变形性骨炎及恶性高钙血等)的治疗。根据其化学组成，双膦酸类药物可分为含氮类与不含氮类双膦酸类药物。常见的含氮类双膦酸类药物包括帕米膦酸钠(pamidronate)、阿仑膦酸钠(alendronate)、利赛膦酸钠(risedronate)和唑来膦酸(zoledronate)等。通过对双膦酸类药物(尤其是生物样品中)的分析可为药代动力学研究、治疗药物检测及用药安全性和有效性的研究提供有效的评估手段。

双膦酸类药物所具有的特殊结构使其分析存在如下困难:(1)由于其极性大，易电离，在非极性的液相色谱柱上保留困难；需要在流动相中添加离子对试剂来提高其在色谱柱上的保留；(2)可用离子交换色谱进行检测，但是由于该类药物存在着多级电离，流动相必须选择强酸或强碱性物质，而固定相又必须为耐强酸强碱的阴离子交换柱，从而保证它们能单一的电离形式，其价格十分昂贵，灵敏度和选择性也较差；(3)由于其难挥发性，不能用气相色谱直接分析，需要进行衍生化转变成挥发性衍生物再进行分析；(4)大多数双膦酸类药物没有可检测的生色团，只能通过衍生手段，对其骨架结构进行修饰，从而改变其理化性质，使其能够被常规的紫外或荧光检测器所检测到。因此，建立一种高效、快捷的检测方法，将有利于双膦酸类的深入研究，也为其进一步的体内研究奠定坚实的基础。

发明内容

鉴于此，本发明提供了一种高效、快捷的检测方法，可准确测定待测样品中的双膦酸类化合物含量，以解决现有技术中双膦酸类药物检测困难的问题。

具体地，本发明提供了一种双膦酸类药物的检测方法，包括以下步骤：

对含双膦酸类药物的待测样品进行预处理，得到预处理后的样品溶液；

采用液相色谱-串联质谱法对所述样品溶液进行检测，得到待测样品中双膦酸类药物的含量，其中，所述液相色谱-串联质谱法的色谱条件包括：采用五氟苯基柱(PFP柱)作为色谱柱，流动相由A相和B相组成，A相为甲酸和甲酸铵的混合水溶液，B相为甲醇。

其中，所述A相中，甲酸的体积分数为0.1～0.5％，甲酸铵的浓度为5～20mM。

PFP柱的强芳香性环可以有效保留强极性的双膦酸类药物，便于在色谱上的分离。

其中，所述五氟苯基柱的柱内径为1～3mm，柱长为50～150mm，填料粒径为1～5μm。

其中，所述色谱柱的柱温为20～40℃。

其中，所述流动相采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序如下：0～0.5min，A相与B相的体积比为95/5；0.5～1.5min，A相与B相的体积比由95/5线性地变为50/50；1.5～2.5min，保持A相与B相的体积比为50/50；2.5～2.6min，A相与B相的体积比由50/50线性地变回95/5；之后将A相与B相的体积比为95/5保持5min。

其中，所述流动相的流速为0.2～0.4mL/min。

其中，所述液相色谱-串联质谱法的色谱条件还包括：进样量为5～20μL。