[发明专利]一种用于阿胶及其复方制剂真伪鉴定的组合物、试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.阿胶及其复方制剂真伪鉴定的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)对照品溶液的制备：

称取对照品检测基质于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超声使样品完全溶解，加入称量好的多肽I、多肽II和多肽III，完全溶解，摇匀，微孔滤膜过滤，续滤液中加胰蛋白酶溶液，酶解；

所述多肽I的氨基酸序列为Ala-Gly-Glu-Thr-Gly-Ala-Ser-Gly-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ala-Gly-Glu-Lys，多肽II的氨基酸序列为Gly-Ala-Ser-Gly-Pro-Ala-Gly-Val-Arg，多肽III的氨基酸序列为Gly-Ser-Glu-Gly-Pro-Gln-Gly-Val-Arg，对照品检测基质为鱼皮胶；

2)待检测样品溶液的制备：

取待测样品，重量记为N₁，加水溶解后，加入三氯乙酸溶液，超声，离心后去除上清液，沉淀用丙酮洗涤、干燥后称重，重量记为N₂；称取一定量沉淀干燥物于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，续滤液中加入胰蛋白酶溶液，酶解；

3)液质联用仪检测

分别取对照品溶液、待检测样品溶液放入液质联用仪进行检测；选择m/z725.3→962.5、818.4，m/z386.4→499.3、643.3，m/z444.0→331.2、613.3作为检测离子对进行MRM扫描，其中选择m/z725.3→962.5、m/z386.4→499.3、m/z444.0→331.2分别作为多肽I、多肽II和多肽III的定量离子对进行定量检测；

4)样品中驴皮源成分含量的计算

以对照品溶液的各多肽的含量为纵坐标、峰面积为横坐标进行标准曲线的绘制，各多肽的线性相关系数R≥0.998，由此计算出混合胶中多肽I、多肽II和多肽III的含量，待检测阿胶样品中多肽I的含量记为M₁、多肽II的含量记为M₂、多肽III的含量记为M₃，然后，按下式计算出各样品中驴皮源成分的含量：

阿胶中驴皮源成分的含量(％)＝(M₁/1448.5–M₂/770.8)×1772/M₃×N₂/N₁。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述的对照品溶液的制备包括以下步骤：

1)基质溶液的制备：

称取0.50g对照品检测基质于250ml量瓶中，加少量1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液，超声使样品完全溶解，用1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液稀释至刻度，摇匀；

2)对照品母液的制备：

称取0.05g对照品检测基质于25ml量瓶中，加少量1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液，超声使样品完全溶解，分别加入28.3mg的多肽I、15.1mg的多肽II和17.3mg的多肽III，用1％w/wpH8.0的NH₄HCO₃溶液稀释至刻度，摇匀；

3)对照品溶液的制备：

采用分步稀释的方法，以基质溶液为溶剂，将对照品母液稀释500～10000倍，微孔滤膜过滤，精密量取续滤液100μl，加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl，37℃恒温酶解12h。