[发明专利]一种通过体胚发生大量繁殖忽地笑的方法

说明书

本发明提供一种通过体胚发生大量繁殖忽地笑的方法，进行规模化生产和繁殖以满足市场需要的忽地笑组织培养步骤包括：A.外植体消毒，B.不定芽的诱导，C.愈伤组织的诱导，D愈伤组织的增殖，E愈伤组织的再分化，F.生根培养，H炼苗与移栽。本发明首次将除草剂毒莠定应用于忽地笑的组织培养，获得了稳定的可大量增殖的忽地笑愈伤组织，愈伤组织诱导率达到95％以上，将忽地笑的繁殖系数至少提高了8‑10倍。不仅降低生产成本，而且可以保存母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短时间内形成大量的优良试管苗，进行规模化、工厂化生产，为观赏园艺、制药等产业以及忽地笑的后续研究提供了大量的原材料。

技术领域

本发明涉及一种体胚发生大量繁殖忽地笑方法，属于植物的人工繁殖和栽培方法技术领域。

背景技术

忽地笑(Lycoris aurea Herb.)又称黄花石蒜，主产我国，分布于我国西南、华东、华南、西北地区的16个省区，日本和缅甸也有少量分布。忽地笑的花叶均具有颇高的观赏价值，其花为金黄色，华亭挺拔，花型奇特；花后冬春季又可观叶，其叶形似兰草，姿态优雅。在日本、荷兰等一些国家，其道路、庭院都广泛栽培忽地笑，是一种颇受人们喜爱的庭院观赏植物。

另外，忽地笑亦具有很高的药用价值，其鳞茎是提取加兰他敏的良好原料，加兰他敏在忽地笑中的含量很高，野生资源中发现的最高含量为0.2％。目前加兰他敏的市场价格为40万元每公斤，因此忽地笑的人工繁育栽培蕴藏着巨大的市场前景和社会效益。

虽然我国的忽地笑资源丰富，但由于目前忽地笑种球市场需求日益增大。而其栽培技术落后，种球繁殖率低，导致其野生资源遭到乱采滥挖。近几年来，由于制药工业的大量提取，原分布最广、蕴藏量最多的红花石蒜(L.radiata)和忽地笑(L.aurea)的野生资源也急剧减少。要解决这一问题，组织培养是一条有效途径，但长期以来忽地笑的组织培养受其种球繁殖率低、褐化等问题较为严重的影响，效率一直较低。之前报道的忽地笑组织培养大多以诱导不定芽为主，少数诱导愈伤的报道主要以小鳞茎和种子为材料，而且诱导率和再分化率较低，繁殖系数不高。本发明通过先诱导出忽地笑的不定芽，再对其无菌苗进行诱导，从体细胞胚的发生途径进行忽地笑愈伤组织诱导，首次将除草剂毒莠定用于忽地笑的组织培养，获得了稳定的可继代增殖的愈伤组织，诱导率可达到95％以上，经过合理的激素调配，诱导出的愈伤组织可再分化出大量的不定芽。此方法对比传统的植物生长激素调节，将忽地笑的繁殖系数至少提高了8倍以上，大大提高了忽地笑组培的繁殖效率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种体胚发生的忽地笑的繁殖方法，进行规模化生产以及以忽地笑组培为基础的其他学科的研究工作的需要。

本发明的技术方案是这样实现的，该种忽地笑繁殖方法的主要特点是：

A外殖体消毒：选取在-4℃，保存30天以上的忽地笑小鳞茎，剥去外层鳞片，切除根部，用0.1％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤15～20min，流水冲洗30～60min后，再在超净工作台上用75％的酒精漂洗30s，无菌水清洗4遍后，用含2～5％次氯酸钠灭菌20～30min，无菌水冲洗4-5遍，最后用无菌滤纸吸干表面水分；

B丛生芽诱导：将消毒好的忽地笑切去上部1/2，将带有鳞茎盘的鳞茎均匀分为4-8块，接种到以下培养基中：MS基本培养基，适当浓度的植物生长激素，蔗糖(食用糖)20～40g/L，适当pH值；培养温度28±1℃，光照强度1000～3000lx，光照时间10～16h，进行光照培养；

C愈伤组织诱导：将分化而成丛生芽(含小鳞茎)切开，去除原有鳞片和褐化部分，接种到以下培养基中：MS基本培养基，蔗糖(食用糖)20～40g/L，适当浓度植物生长激素，适当pH值；培养温度28±1℃；

D愈伤组织增殖：将诱导出20天左右的愈伤组织切下，接种到以下培养基上：MS基本培养基，适当植物生长激素，培养温度28±1℃，光照时间10～16h，进行光照培养30～40天；