[发明专利]一种测定猪细小病毒的TCID50的试剂盒以及应用与方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体而言，涉及一种测定猪细小病毒的TCID₅₀的试剂盒以及应用与方法。

背景技术

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一，最早于1966年在用猪肾原代细胞培养猪瘟病毒时被首先发现，1967年从繁殖障碍母猪流产和死产胎儿中分离到该病毒，从而首次证明了它的致病作用。猪是PPV唯一易感动物，该病毒主要侵害母猪，特别是初产母猪及血清学阴性经产母猪，造成死胎、木乃伊胎、畸形胎、流产、死产及产弱仔猪等，但母猪本身无明显症状；也可引起仔猪的腹泻、皮炎及关节炎。我国已经先后在北京、上海、湖北、河南等多地发生该病的流行。随着大型集约化养猪场的大量出现，该病呈现上升趋势，给养猪业造成巨大的经济损失。

针对该病尚无有效的治疗药物，世界范围内多采用疫苗免疫来控制本病的流行。目前，国内广泛使用PPV灭活苗来预防该病的发生，而评价PPV灭活疫苗的保护效果主要取决于疫苗中病毒的效价。因此寻求一个简单、快速、灵敏、精准的病毒效价测定方法对PPV疫苗生产工艺具有很重大的意义。

目前在疫苗生产过程中，多使用PK15和ST细胞来增殖病毒，而测定病毒效价最经典、最常用的方法是TCID₅₀方法。TCID₅₀(Tissue culture infective dose)，又称50％组织细胞感染量，即指能使半数组织细胞培养物感染的病毒量，可反应病毒感染性的强弱，但不准确测定感染性病毒颗粒的数量。由于PPV在细胞上增殖引起的细胞病变出现慢且不如猪伪狂犬病毒、猪乙脑病毒等产生的细胞病变易观察，利用现有技术中的方法测定猪细小病毒样本的TCID₅₀耗时长，平均5-6天，而且需要用肉眼在显微镜下观察是否发生病变，从而计算感染病毒发生病变的病变率，容易造成病变结果的漏检，统计出错误的病变率，导致得出不准确的TCID₅₀。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定猪细小病毒的TCID₅₀的试剂盒，该试剂盒对猪细小病毒TCID₅₀的测定是通过吸光值判断敏感细胞是否发生病变，计算发生病变的阳性率，从而计算出猪细小病毒的TCID₅₀，具有准确、快速的特点。

本发明的另一目的在于提供上述试剂盒在测定猪细小病毒的TCID₅₀中的应用。采用上述试剂盒对猪细小病毒的TCID₅₀的测定是通过吸光值判断敏感细胞是否发生病变，计算发生病变的阳性率，从而计算出猪细小病毒的TCID₅₀，具有准确、快速的特点。

本发明的再一目的在于提供一种测定猪细小病毒的TCID₅₀的方法，该方法与上述测定猪细小病毒的TCID₅₀的试剂盒联用，实现对猪细小病毒的TCID₅₀的测定，通过吸光值判断敏感细胞是否发生病变，计算发生病变的阳性率，从而计算出猪细小病毒的TCID₅₀，具有准确、快速的特点。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

一种测定猪细小病毒的TCID₅₀的试剂盒，其包括用于固定猪细小病毒的固定液和用于结合猪细小病毒的抗体，抗体标记有用于催化底物显色的催化酶。

上述测定猪细小病毒的TCID₅₀的试剂盒在测定猪细小病毒的TCID₅₀中应用。

一种测定猪细小病毒的TCID₅₀的方法，其包括：

将待测猪细小病毒样本接种至含有敏感细胞的培养液中，进行病毒培养。

往经过病毒培养后的敏感细胞中加入用于固定猪细小病毒的固定液进行固定处理。

经固定处理后，加入标记有用于催化底物显色的催化酶的抗体及含有底物的显色液，进行显色反应。

于预设波长下测定待测猪细小病毒样本的吸光值，根据吸光值判断敏感细胞是否发生病变。