[发明专利]一种测定猪细小病毒的TCID50的试剂盒以及应用与方法

权利要求书

1.一种测定猪细小病毒的TCID₅₀的试剂盒，其特征在于，其包括用于固定猪细小病毒的固定液和用于结合所述猪细小病毒的抗体，所述抗体标记有用于催化底物显色的催化酶。

2.根据权利要求1所述的测定猪细小病毒的TCID₅₀的试剂盒，其特征在于，所述固定液由甲醇和丙酮按体积比为0.8-1.2:1的比例配制而成。

3.根据权利要求1所述的测定猪细小病毒的TCID₅₀的试剂盒，其特征在于，所述抗体为抗猪细小病毒的抗体，所述催化酶为辣根过氧化物酶。

4.根据权利要求1所述的测定猪细小病毒的TCID₅₀的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括抗猪细小病毒的第一抗体，所述抗体为抗所述第一抗体的第二抗体，所述催化酶为辣根过氧化物酶。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的测定猪细小病毒的TCID₅₀的试剂盒，其特征在于，所述抗体的种属来源是兔源、猪源、小鼠源或大鼠源中的任意一种。

6.权利要求1-5中任一项所述的测定猪细小病毒的TCID₅₀的试剂盒在测定猪细小病毒样本的TCID₅₀中的应用。

7.一种测定猪细小病毒的TCID₅₀的方法，其特征在于，其包括：

将待测猪细小病毒样本接种至含有敏感细胞的培养液中，进行病毒培养；

往经过所述病毒培养后的所述敏感细胞中加入用于固定猪细小病毒的固定液进行固定处理；

经所述固定处理后，加入标记有用于催化底物显色的催化酶的抗体及含有所述底物的显色液，进行显色反应；

于预设波长下测定所述待测猪细小病毒样本的吸光值，根据吸光值判断所述敏感细胞是否发生病变。

8.根据权利要求7所述的测定猪细小病毒的TCID₅₀的方法，其特征在于，将所述待测猪细小病毒样本接种至含有所述敏感细胞的所述培养液中是指：将所述待测猪细小病毒样本以6-20个浓度梯度进行梯度稀释后，将每个梯度浓度的待测猪细小病毒样本分别接种至所述培养液中，并且每个所述梯度浓度设置多个重复，其中，任意两个相邻所述梯度浓度之间的稀释倍数为2-15倍。

9.根据权利要求7或8所述的测定猪细小病毒的TCID₅₀的方法，其特征在于，所述敏感细胞为猪睾丸细胞的原代细胞或传代细胞；或者所述敏感细胞为猪肾细胞的原代细胞或传代细胞。

10.根据权利要求7或8所述的测定猪细小病毒的TCID₅₀的方法，其特征在于，所述病毒培养的条件为：温度36-38℃，4.5-5.5％CO₂，培养24-48小时。