[发明专利]一种铁线莲属植物直接不定芽离体发生的方法

说明书

本发明提供了一种铁线莲属植物直接不定芽离体发生的方法，具体地，本发明提供了一种铁线莲属植物的繁殖方法，包括步骤：(a)将所述铁线莲属植物的茎段无菌培养获得带腋芽的茎段；(b)切除所述步骤(a)获得的茎段的腋芽后进行诱导培养，长出不定芽；(c)对所述步骤(b)获得的不定芽进行培养，生根获得植株。本发明首次以铁线莲属植物无菌萌发的茎段为起始外植体，进行离体繁殖，不经过愈伤组织形成阶段的直接诱导不定芽发生,并经过再生芽苗的伸长、生根及移栽成苗后，可获得大量再生植株表型一致性高、遗传稳定性好的铁线莲属植物。

技术领域

本发明涉及铁线莲属植物栽培领域，具体涉及一种铁线莲属植物直接不定芽离体发生的方法。

背景技术

铁线莲属(Clematis)为多年生木质或草质藤本，或为直立灌木或草本，全世界约300种，分布于热带及亚热带地区，我国约有108种，全国各地都有分布。铁线莲属植物兼具药用与观赏功能，植株含有三萜皂苷、生物碱、香豆素、木脂素和黄酮类化学成分，具有抗菌、消炎、抗肿瘤和镇痛等药理作用。其花型多样，色彩缤纷，素有“藤本皇后”的美誉，现有的栽培品种600余种，在城市园林中已有应用，深受家庭园艺爱好者的推崇。铁线莲可点缀于围墙、栅栏、棚架或作绿篱，在日本和欧美等国家被广泛用于庭园中，相比之下目前我国铁线莲属植物在园林中的应用不多，引种栽培的范围也较小。目前国内市场销售的铁线莲栽培种类多来自欧洲，没有我国自主产权的品种，同时，许多国外品种在栽培过程中不能适应江南地区夏季湿热气候，出现枝叶大量枯萎的情况，严重影响了观赏效果。国内有关铁线莲属植物育种及繁殖技术的报道很少，仅涉及东北铁线莲、钝萼铁线莲等少数几种。

目前国内对铁线莲属植物的研究主要集中在种质资源调查、系统分类研究和栽培繁殖等方面。铁线莲属植物存在结实少或萌发时间长、发芽率低等问题，不宜采用有性繁殖，园林栽培应用受到限制。

通常情况下，铁线莲属直接不定芽诱导不定芽发生频率低下，且未见报道。

因此，本领域迫切需要开发一种新型的、可以实现铁线莲属植物的大规模种植的直接不定芽离体发生的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型的、可以实现铁线莲属植物的大规模种植的直接不定芽离体发生的方法。

本发明第一方面提供了一种铁线莲属植物的繁殖方法，包括步骤：

(a)将所述铁线莲属植物的茎段无菌培养获得带腋芽的茎段；

(b)切除所述步骤(a)获得的茎段的腋芽后，将所述茎段进行诱导培养，长出不定芽；和

(c)对所述步骤(b)获得的不定芽进行培养，生根获得植株。

在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述茎段的长度为0.3-5cm，较佳地，0.5-4cm，更佳地，0.6-2cm。

在另一优选例中，所述步骤(a)中，将所述茎段置于含0.1-10mg/L BA和0.01-1mg/L NAA)的ML培养基上，于23±1℃无菌培养，所述茎段萌发获得所述带腋芽的茎段。

在另一优选例中，所述步骤(a)中，将所述种子置于含0.5-8mg/L BA和0.05-0.8mg/L NAA的ML培养基上，于23±1℃无菌培养，所述茎段萌发获得所述带腋芽的茎段。

在另一优选例中，所述步骤(a)中，将所述种子置于含0.8-2mg/L BA和0.08-0.3mg/L NAA的ML培养基上，于23±1℃无菌培养，所述茎段萌发获得所述带腋芽的茎段。

在另一优选例中，所述步骤(a)中，培养20-30天后茎段开始萌发，茎节开始抽出腋芽，4-6周后新抽出的腋芽开始重新分节，抽芽率为95-100％。