[发明专利]一种胡萝卜软腐欧文氏菌、其分泌的植物免疫激活蛋白及应用有效
| 申请号： | 201611190279.X | 申请日： | 2016-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN106867929B | 公开（公告）日： | 2020-06-23 |
| 发明（设计）人： | 贾振华;宋水山;刘方;黄亚丽;宋聪;郝少彦;李海利;赵芊;黄媛媛;马宏;刘昆昂 | 申请（专利权）人： | 河北省科学院生物研究所 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C07K14/27;C12N15/31;C12P21/02;A01N47/44;A01P3/00;C12R1/18 |
| 代理公司： | 石家庄新世纪专利商标事务所有限公司 13100 | 代理人： | 杨钦祥;董金国 |
| 地址： | 050081 河*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 胡萝卜 软腐 欧文 分泌 植物 免疫 激活 蛋白 应用 | ||
1.一种胡萝卜软腐欧文氏菌 （Erwinia carotovora subsp. Carotovora） Ecc 36，该菌株于2015年11月27日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心进行了保藏，保藏号为：CGMCC No. 11751。
2.权利要求1所述的胡萝卜软腐欧文氏菌（Erwinia carotovora subsp. Carotovora）Ecc 36分泌的植物免疫激活蛋白HrpNEccPR，其特征在于：其氨基酸序列如 SEQ ID NO:1 所示。
3.表达权利要求 2 所述植物免疫激活蛋白 HrpNEccPR的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO:2 所示。
4.权利要求2所述的植物免疫激活蛋白HrpNEccPR的粗品的制备方法，其特征在于：将所述胡萝卜软腐欧文氏菌Ecc 36发酵液离心收集菌体，用无菌水悬浮，将悬浮液煮沸，离心收集上清，冷冻干燥，获得所述植物免疫激活蛋白HrpNEccPR粗品。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述无菌水的用量为发酵液质量的1/2，将所述悬浮液煮沸30分钟，在9000rpm下将悬浮液离心30分钟。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述植物免疫激活蛋白HrpNEccPR粗品中蛋白含量不低于43wt%。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：其具体步骤为：将所述胡萝卜软腐欧文氏菌Ecc36菌株在LB固体培养基上采用划线法，25℃培养24小时，获得单菌落，挑取单菌落于液体LB培养基中，于25℃过夜培养，获得Ecc36菌株种子，然后以10wt%接种于液体LB培养基中，25℃培养48小时，9000rpm离心30分钟，收集菌体，加入原液体LB培养基1/2倍的无菌水悬浮，将其悬浮液煮沸30分钟，9000rpm离心30分钟，收集上清，冷冻干燥，获得所述植物免疫激活蛋白HrpNEccPR粗品。
8.权利要求2所述的植物免疫激活蛋白HrpNEccPR在制备防治植物软腐病生物制剂中的应用。
9.利用权利要求2所述的植物免疫激活蛋白HrpNEccPR制备的喷施药液，其特征在于：其中植物免疫激活蛋白HrpNEccPR的含量为18-100mg/L。
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