[发明专利]微生物复合菌剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种微生物复合菌剂，其特征在于，所述微生物复合菌剂的微生物主体包括柴油食烷菌(Alcanivorax dieselolei)、海绵假单胞菌(Pseudomonas pachastrellae)、威尼斯不动杆菌(Acinetobacter venetianus)以及除烃海杆菌(Marinobacterhydrocarbonoclasticus)。

2.根据权利要求1所述的微生物复合菌剂，其特征在于，所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)、所述海绵假单胞菌(Pseudomonas pachastrellae)、所述威尼斯不动杆菌(Acinetobacter venetianus)以及所述除烃海杆菌(Marinobacterhydrocarbonoclasticus)在所述微生物复合菌剂中的浓度各自独立地为10⁷-10⁹cfu/mL。

3.根据权利要求1所述的微生物复合菌剂，其特征在于，所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)的保藏登记号为1A00001，所述海绵假单胞菌(Pseudomonas pachastrellae)的保藏登记号为1A00102，所述威尼斯不动杆菌(Acinetobacter venetianus)的保藏登记号为1A00294，所述除烃海杆菌(Marinobacter hydrocarbonoclasticus)的保藏登记号为1A03971，保藏单位为中国海洋微生物菌种保藏管理中心。

4.一种如权利要求1至3任一项所述的微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于，其包括：

将所述柴油食烷菌(Alcanivorax dieselolei)、所述海绵假单胞菌(Pseudomonaspachastrellae)、所述威尼斯不动杆菌(Acinetobacter venetianus)以及所述除烃海杆菌(Marinobacter hydrocarbonoclasticus)接种于菌剂培养基进行共同培养，得到所述微生物复合菌剂。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，将所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)、所述海绵假单胞菌(Pseudomonas pachastrellae)、所述威尼斯不动杆菌(Acinetobacter venetianus)以及所述除烃海杆菌(Marinobacterhydrocarbonoclasticus)接种于所述菌剂培养基之前先分别接种于种子液培养基中进行种子液培养，所述种子液培养基包括二水合柠檬酸钠15-25g/L、氯化铵0.8-1.5g/L、三水合磷酸氢二钾0.2-0.8g/L、磷酸二氢钾0.1-0.4g/L以及人工合成海水。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述种子液培养基的起始pH为6.0-8.0，培养在20-28℃条件下进行。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在将所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)、所述海绵假单胞菌(Pseudomonas pachastrellae)、所述威尼斯不动杆菌(Acinetobacter venetianus)以及所述除烃海杆菌(Marinobacterhydrocarbonoclasticus)接种于所述种子液培养基之前先接种于活化菌株液体培养基中进行第一次活化培养，所述活化菌株液体培养基包括胰蛋白胨8-12g/L、酵母提取物4-6g/L、氯化钠25-35g/L以及去离子水；其中，pH值为6-7.5。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，将经过所述第一次活化培养得到的菌液分别接种于活化菌株固体培养基中进行第二次活化培养，所述活化菌株固体培养基包括胰蛋白胨8-12g/L、酵母提取物4-6g/L、氯化钠5-35g/L和琼脂粉1.2-2.0g/L以及去离子水；其中pH值为6-7.5。