[发明专利]检测孔雀石绿的适配体电化学生物传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种检测孔雀石绿的适配体电化学生物传感器，包括识别元件和换能器，其特征在于，识别元件是单链DNA适配体，序列为GGATCCCGACTGGCGAGAGCCAGGTAACGAATGGATCC，含有38个碱基，5’端修饰-SH-(CH₂)₆-，在3’端修饰电活性物质亚甲基蓝MB作为信标分子；换能器为常用的电化学型换能器。

2.一种权利要求1所述传感器的制备方法，具体步骤及参数如下：

1)金电极的抛光及活化处理：将金电极在抛光布上用氧化铝粉末打磨，用乙醇和超纯水分别超声清洗，然后在硫酸溶液中电化学扫描活化，超纯水冲洗后，用氮气吹干待用；

2)适配体溶液的配制：将单链DNA适配体冷冻液，先涡旋1～3min，使其均匀分散，用超纯水配制浓度为3.3～10μmolL^-1的适配体溶液；

3)修饰电极的制备：取5～10μL步骤2)中配制的适配体溶液，滴在步骤1)活化后的金电极表面，将电极置于4℃的冰箱中组装12～16h，用蒸馏水洗去非特异性吸附的适配体，然后用于检测。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述的修饰电极不使用时，在冰箱4℃下保存。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，以步骤3)中制备的修饰电极为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，Pt为对电极，磷酸缓冲液为检测底液，采用差分脉冲伏安法DPV来检测，扫描电位范围为0.2～-0.5V，振幅为0.05V，以MB作为信标分子，记录其DPV谱图，得到MB的还原峰电流值，作为空白时的电流响应I₀；再将修饰电极依次浸入含有孔雀石绿标准品的检测底液中，在浓度为1×10^-1～1×10⁴pg L^-1的各个数量级分别选取1-2个测试点，各浓度在室温下孵育100～600s，接下来记录工作电极的DPV曲线，得到在不同浓度孔雀石绿的MB的DPV谱图以及相应的还原峰电流值I_p，并计算不同浓度的孔雀石绿相对于初始适配体传感器峰电流的相对变化差值ΔI＝I_p-I₀；以含有孔雀石绿标准品的检测底液浓度的对数值lgC为横坐标，ΔI为纵坐标作图，建立标准曲线。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的磷酸缓冲液的pH值为6.0～8.0，浓度为0.05～0.1molL^-1。