[发明专利]一种透明质酸混纺纳米纤维固定酶的制备方法

权利要求书

1.一种透明质酸混纺纳米纤维固定酶的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

1)将PMA-PAA溶液与透明质酸钠溶液混合，震荡混匀后，即得到纺丝前驱体溶液；

2)取纺丝前驱体溶液，采用静电纺丝技术进行纺丝，得到纳米纤维膜；

3)室温下，将纳米纤维膜冲洗后，浸泡于盐酸溶液中，再冲洗去除表面盐酸，吹干后置于EDC/NHS溶液中反应活化，再冲洗，吹干后置于酶溶液中，震荡反应后，即得透明质酸混纺纳米纤维固定酶；

步骤(1)中透明质酸钠溶液与PMA-PAA溶液的体积比为(0.5-3):5；

步骤1)中，所述PMA-PAA溶液的制备方法为：

将2mL丙烯酸和14mL丙烯酸甲酯溶于40mL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入0.2～0.3g偶氮二异丙腈，充氮气10～12min后，放到60～80℃恒温水浴锅加热，反应15～24小时，即可得到黏稠、透明、均一的PMA-PAA溶液；

步骤1)中，步所述透明质酸钠溶液的制备方法为：

将DMF溶液和蒸馏水混合后，将透明质酸钠固体加入其中，溶解得到透明质酸钠溶液；其中，DMF溶液、蒸馏水和透明质酸钠固体的用量比为：3ml:3ml：8～48mg；

步骤3)中所述酶溶液为南极假丝酵母酶溶液。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述静电纺丝技术进行纺丝具体为：纺丝在室温条件下进行，湿度30％～40％，溶液注射速度为0.3～0.5mL/h，电压为16～18kV，喷丝口与接收屏距离为12～18cm，针头直径为5.5mm针头接入正极，铝箔接入负极；纺丝液在电场中产生稳定细流，细流经过分裂与拉伸，最终收集到接收铝箔上，接收时间24～26小时。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中纳米纤维膜在EDC/NHS溶液中活化时间为0.6-1.5h。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述酶溶液酶浓度在4～10mg/mL。

5.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述震荡反应是指25℃水浴中振荡反应18-24小时。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)具体为：

取步骤2)制备的纳米纤维膜，用蒸馏水和磷酸盐缓冲溶液分别冲洗后，将纳米纤维膜放入0.01mol/L的盐酸溶液浸泡1h，取出后用磷酸盐缓冲溶液反复冲洗，以除去表面粘附的盐酸，将酸化的膜分别浸入磷酸盐缓冲溶液和超纯水中超声1分钟，取出吹干保存备用，然后，在25℃水浴条件下，将纳米纤维膜放入EDC/NHS溶液中反应活化1h，活化的膜用磷酸盐缓冲溶液和超纯水冲洗，以除去表面粘附的活化剂，吹干后，将表面活化的纳米纤维膜浸入配制好的南极假丝酵母酶溶液中，酶浓度在4～10mg/mL，于25℃水浴中振荡反应20小时后将膜取出，用磷酸盐缓冲溶液和超纯水冲洗，以除去表面附着的酶液，晾干备用。