[发明专利]金黄色葡萄球菌肠毒素C2的核酸适配体C201及其筛选方法和应用

说明书

本发明涉及一种金黄色葡萄球菌肠毒素C2的核酸适配体C201及其筛选方法和应用，核酸适配体C201的序列为：AGGGCCGAGCTCACTTGTACATAGGTCCATTAGCAGGAGCGTAAGCTAAGGCCCCGCCGGCACAATTGTGC；它的筛选方法为：基于核酸适配体的体外SELEX筛选技术，利用羧基磁珠作为固相介质，以金黄色葡萄球菌肠毒素C2为靶标，通过金黄色葡萄球菌肠毒素C2磁珠从ssDNA文库中筛选得到与金黄色葡萄球菌肠毒素C2特异性结合的核酸适配体，本发明的核酸适配体C201具有高亲和力、高特异性地与金黄色葡萄球菌肠毒素C2结合的优点。

技术领域

本发明涉及一种金黄色葡萄球菌肠毒素C2的核酸适配体C201及其筛选方法和应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌肠毒素是由金黄色葡萄球菌分泌的具有超抗原活性的外毒素。金黄色葡萄球菌肠毒素可不经抗原提呈细胞加工，直接与MHCⅡ类分子非限制性的结合，形成的复合物与T淋巴细胞抗原受体的β链V区结合，大量激活T淋巴细胞，使其活化、增殖，并释放大量的炎性细胞因子引起强烈的免疫应答，最终导致炎症失控和多器官的损害，引起毒素休克等疾病。此外，由于金黄色葡萄球菌肠毒素较能抗消化，耐热以及只需很小剂量就可引发T细胞应答，金黄色葡萄球菌肠毒素也被作为肿瘤治疗的超抗原药物。

金黄色葡萄球菌肠毒素有多个血清型，分别是A型、B型、C1型、C2型、C3型、D型、E型、G型、H型、I型、M型、N型、O型和毒性休克综合症1型毒素、毒性休克综合症2型毒素等，其中金黄色葡萄球菌肠毒素C2不仅与金黄色葡萄球菌相关感染有关，同时也是金黄色葡萄球菌肠毒素中应用最多的超抗原药物。

检测金黄色葡萄球菌肠毒素C2主要采用免疫学方法，包括沉淀反应、凝集反应、ELISA、固相RIA、生物传感器等，这些方法使用抗体作为金黄色葡萄球菌肠毒素C2检测的识别元件，而抗体的制备存在周期长，步骤繁琐，成本高等不足之处。近年来，以检测金黄色葡萄球菌肠毒素C2基因为目标的分子生物学方法发展较快，但PCR等分子生物学方法仍存在假阳性、假阴性等技术难题。因此，研制具有更高灵敏度、经济、简便的金黄色葡萄球菌肠毒素C2检测新技术，对于食品卫生监督、临床金黄色葡萄球菌感染的诊疗等都有重要意义。

治疗金黄色葡萄球菌肠毒素C2引起的毒素休克，临床常采用抗炎、补液等对症支持疗法。最新研究发现，抑制金黄色葡萄球菌肠毒素C2的超抗原活性，在初始阶段阻断炎症级联反应的发生，是治疗金黄色葡萄球菌肠毒素C2相关疾病的有效策略。基于此策略，研制各种多肽药物、抗体药物、疫苗等，已成为的金黄色葡萄球菌肠毒素C2生物技术新药研究的热点。

金黄色葡萄球菌肠毒素C2超抗原药物的获得，常采用基因克隆的方法，将金黄色葡萄球菌肠毒素C2基因片段克隆至原核表达载体中，在大肠杆菌中表达并纯化。但这种方法中纯化步骤常采用离子交换方法或带标签的亲和纯化方法，前者吸附选择特异性差，后者试剂成本较高。

适配体又被称为“合成抗体”、“化学抗体”，其化学本质是一条单链寡核酸分子(ssDNA或RNA)折叠成特定三维结构与靶物质高亲和力和高特异性结合。适配体的获得通过指数富集配体的系统进化技术(Systematic evolution of ligands byexponentialenrichment，SELEX)的体外筛选过程。核酸适配体具有高亲和力、高特异性、可体外合成、可通过修饰改变其功能及药代动力学特性、无免疫原性、经济等特点。基于上述优势开发的核酸适配体药物可特异性阻断靶标功能；将核酸适配体作为识别元件，还可开发简便、精准的检测新技术以及高效、经济的亲和纯化系统。因此，筛选出高特异性、高亲和力结合金黄色葡萄球菌肠毒素C2的核酸适配体具有重要的科研、临床和市场价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有高特异性和高亲和力的金黄色葡萄球菌肠毒素C2的核酸适配体C201及其筛选方法和应用。

本发明的目的通过如下技术方案实现：一种金黄色葡萄球菌肠毒素C2的核酸适配体C201，它的序列如下：