[发明专利]心肌肌钙蛋白I/N‑端脑利钠肽前体/D二聚体三合一测定试剂盒及制法

说明书

技术领域：

本发明涉及医学免疫学中荧光免疫层析技术领域，具体地说是一种能够快速准确的同时对血浆和全血样品中心肌肌钙蛋白I、N-端脑利钠肽前体、D二聚体等三个心脑血管疾病相关指标进行定量分析的三合一测定试剂盒及制法。

背景技术：

心肌肌钙蛋白I(Cardiac Troponin I，cTnI)可作为心肌损伤标志物。由于其高度的心肌特异性，对于心肌损伤的高度敏感性及较长的窗口期，不仅成为判定心肌损伤，特别是诊断急性心梗的“金标准”。而且已成为判定冠脉综合征病人处于心肌损伤风险的最合适的标志物。肌钙蛋白的升高还作为有力的证据可支持临床医生及早做出抗血栓、抗血小板凝集及参与性治疗的决定。N端脑利钠肽前体(NT-proBNP)是由心、脑分泌的一种含32个氨基酸的多肽激素，心室张力增加时，心脏超负荷促进其分泌，在机体中起排钠、利尿、扩张血管的生理作用。其升高浓度和心衰(急性心衰AHF慢性心衰CHF)严重程度相一致。疑似心衰(HF)时，应首选N端脑利钠肽前体(NT-proBNP)的检测。N端脑利钠肽前体(NT-proBNP)阴性有很高的预测价值，可排除心衰的存在。在呼吸困难患者，N端脑利钠肽前体(NT-proBNP)是一个将发生(HF)的较强预示因子，能有效地鉴别慢性阻塞性呼吸困难和心源性呼吸困难。尤其是在筛选左室功能不良(LVD)以及心肌梗死后危险度评价方面能显示出明显优越性。D-二聚体是纤溶酶分解纤维蛋白的产物。只有当纤维蛋白原首先被凝血酶分解产生纤维蛋白多聚体，然后再由纤溶酶分解纤维蛋白多聚体才能生成D-二聚体。D-二聚体主要反映纤维蛋白溶解功能。只要机体血管内有活化的血栓形成及纤维溶解活动，D-二聚体就会升高。心肌梗死，脑梗死，肺栓塞，静脉血栓形成，手术，肿瘤，弥漫性血管内凝血，感染及组织坏死等均可导致D-二聚体升高。特别对老年人及住院患者，因患菌血症等病易引起凝血异常而导致D-二聚体升高。纤维D-二聚体是深静脉血栓(DVT)，肺栓塞(PE)，弥漫性血管内凝血(DIC)的关键指标

cTnI/NT-proBNP/D-Dimer联合检测对于心衰心梗的综合判断具有一定的临床价值，是优于cTnI/CK-MB/MYO组合的新的急诊三项。

免疫分析技术是利用微量抗原与相应的高特异性抗体之间的免疫反应，来检测如激素、药物、蛋白质、多肽、酶、肿瘤相关抗原、微生素、病毒、细菌及金属元素等生物体内活性物质。免疫分析技术包括标记免疫分析、非标记免疫分析和仪器免疫分析。本试剂盒利用的含有稀土元素的羧基乳胶微球标记免疫分析技术是属于标记免疫分析之一种。

荧光免疫分析(FIA)和放射免疫分析(RIA)自问世以来，经历了几十年的发展，但是人们越来越感觉到FIA因自然本地太高，干扰检测结果；RIA采用同位素标记，对人体有极大危害并给实验带来不便。酶免疫分析(EIA)也因酶本身不稳定，受其他影响因素较大，推广应用受到限制。80年代初，人们开始研究用稀土元素代替荧光物质和同位素标记蛋白质或抗体，将时间分辨技术引入到生物检测领域，建立了新型的超微量时间分辨荧光免疫分析技术(Time resolved Fluoroimmunoassay，简称TrFIA)。该技术采用多学科先进技术，集结了其他免疫分析的特点，在免疫学、分子生物学、细胞学和医学等领域，取得长足的发展和广泛应用。

TrFIA利用了具有独特荧光特性的3价稀土离子及螯合物为示踪物代替荧 光物质、酶、同位素、化学发光物质，标记抗体、抗原、激素、多肽、蛋白质、核酸探针及生物细胞，待反应体系(如抗原抗体反应、核酸探针杂交、生物素亲和素反应以及靶细胞对效应细胞的杀伤效应等)发生后，用TrFIA检测仪测定反应产物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对荧光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分析。在通常的荧光测定中，由于测试样品中含有多种荧光成分，背景荧光(来自样品中的胶体颗粒和溶剂分子引起的散射光以及血清中蛋白质和其他化合物发出的非特异性荧光)强度大、干扰强，成为荧光分析法大范围推广的瓶颈。TrFIA之所以能够成为继EIA、RIA之后一种新的灵敏的制法，主要取决于镧系元素独特的荧光特点、检测中采用的波长分辨和时间延迟技术以及解离-增强技术。