[发明专利]一种检测七种β-肾上腺素受体激动剂的免疫电化学传感器及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种检测七种β‑肾上腺素受体激动剂的免疫电化学传感器及其制备方法和应用。该免疫电化学传感器包括基底玻碳电极，和依次涂布在所述基底玻碳电极表面的膜层、检测层，所述检测层的材料为β‑激动剂通用半抗原4‑(4‑(2‑叔丁胺基)1‑羟乙基)苯基丁酸溶液。制备时先在洁净的基底玻碳电极表面滴涂石墨烯/壳聚糖分散液，晾干形成膜层，然后在膜层表面滴涂4‑(4‑(2‑叔丁胺基)1‑羟乙基)苯基丁酸溶液，晾干即可。本发明涉及的传感器基于β‑激动剂宽谱特异性抗体对多种β‑激动剂的交叉免疫反应，能实现对包括克伦特罗、沙丁胺醇、马布特罗、溴布特罗、西布特罗、妥布特罗、特步他林在内的七种β‑激动剂的检测。

技术领域

本发明属于食品安全检测和分析化学技术领域，具体涉及一种检测七种β-肾上腺素受体激动剂的免疫电化学传感器及其制备方法和应用。

背景技术

β-肾上腺素受体激动剂，简称β-激动剂，是动物源性食品中检出率最高、危害最严重的化学性残留危害物，其中最著名的就是克伦特罗(clenbuterol,CL)，俗称“瘦肉精”。上世纪80年代，美国脂胺公司的科研人员意外发现，“瘦肉精”能增强动物脂肪分解，促进蛋白质合成，大大缩短肉品上市周期，显著提高胴体瘦肉率、饲料回报率和经济效益。随后在世界各地迅速推广，80年代后期，传入我国并在许多地区的饲料加工企业和养殖业推广使用，很快成为养殖业应用最广泛的“添加剂”。

“瘦肉精”除克伦特罗外，还包括沙丁胺醇(salbutamol,SAL)、莱克多巴胺(ractopamine,RAC)等20多个结构和性质相类似的化合物。这类化合物进入体内后选择性作用于腺苷酸环化酶，导致人体产生低敏感现象，哮喘发生率和发病程度升高；还可导致内分泌紊乱，诱发染色体畸变及恶性肿瘤，严重时可致人死亡。因此我国和世界上大多数国家都明文禁止“瘦肉精”用作饲料添加剂。

目前，β-激动剂类兽药残留的检测方法主要包括高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、酶联免疫法(ELISA)和荧光免疫法(FIA)等。

色谱法是β-激动剂兽药残留的主要检测方法，但是色谱法检测成本高、操作复杂、大量的阴性样品重复检测；而酶联免疫法具有特异性强、样品前处理简单等优点，但特异性强的特点同时也决定了它的致命缺点：一种酶联免疫试剂盒或试纸条只能检测一种兽药残留，而无法检测其它的同类兽药残留，这就是容易出现漏检的原因(如2011年轰动全国的“双汇瘦肉精”事件)；此外，随着β-激动剂多种替代品的出现，如果进行完全检测，一个样品需要使用多种检测产品，大大提高了检测成本和工作时间，失去了快速筛选的意义。

多残留免疫分析能同时检测一类药物残留，其低成本、高通量、快速现场的优点是现有的色谱法和特异性免疫方法无法比拟的，是未来食品安全检测领域的关键技术之一，逐渐引起重视。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种检测七种β-肾上腺素受体激动剂的免疫电化学传感器及其制备方法和应用，所述电化学传感器基于宽谱特异性抗体抗体的交叉反应来实现七种β-肾上腺素受体激动剂的检测。

为解决现有技术问题，本发明采取的技术方案为：

一种检测七种β-肾上腺素受体激动剂的免疫电化学传感器，包括基底玻碳电极，和依次涂布在所述基底玻碳电极表面的石墨烯/壳聚糖混合膜层、检测层，所述检测层的材料为β-激动剂通用半抗原4-(4-(2-叔丁胺基)1-羟乙基)苯基丁酸(TBPBA)溶液，β-激动剂通用半抗原4-(4-(2-叔丁胺基)1-羟乙基)苯基丁酸的结构式为

作为改进的是，所述检测曾上设有封闭层。

作为改进的是，所述封闭层的材料为牛血清蛋白溶液。