[发明专利]一种含嘧菌酯的杀菌剂组合物、其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体来说涉及一种，同时还涉及该含嘧菌酯的杀菌剂组合物的制备方法，及该含嘧菌酯的杀菌剂组合物在防治烟草赤星病、烟草白粉病及烟草灰霉病方面的用途。

背景技术

烟草赤星病(brown spot)和烟草白粉病(white powder)是烟草生长期发生的分别由烟草赤星病菌Alternaria alternata(Fr.)Keissl和烟草白粉病菌Erysiphe cichoracearum DC引起的真菌性病害。它们均具有间歇性和爆发性的特点，严重时烟叶发病率可高达90％，使烤烟质量下降1-2个等级，重病区减产、减收达50％以上。近年来，烟草赤星病和烟草白粉病一直是严重威胁我国烟草生产的主要病害之一。此外，由灰葡萄孢(Botrytis cinerea Pers.:Fr)引起的烟草灰霉病也是烟草上的重要病害之一，烟草整个生育期内均可发病，以苗期及现蕾期发生较重。苗期主要发生于近地面的叶片上，高湿环境下病斑迅速扩展，直径可达5厘米以上，病斑呈湿腐状，其上布满灰色霉层。在集约化漂浮育苗的情况下，病菌很快扩散，严重威胁着烟苗的生产。因此，对烟草赤星病、白粉病、灰霉病的防治迫在眉睫。

长期以来，生产上主要靠化学防治药剂依靠菌核净来防治烟草赤星病，多菌灵、三唑酮等来防治烟草白粉病与灰霉病。由于病菌具有繁殖速率高、遗传变异大和适合度高的特性，多年连续大量使用化学药剂使得病原菌对主要防治杀菌剂产生严重的抗药性。因此，亟待寻找新的病害防治解决方案。甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂嘧菌酯是一种现代广谱、高效、内吸性杀菌剂，纯品为浅综合结晶固体，别名为(E)-[2-[6-(2-氰基苯氧基)嘧啶-4-基氧]苯基]-3-甲氧基丙烯酸甲酯，相对密度为1.34g/cm³，溶解度20℃时为6mg/L，蒸气压20℃为1.1×10^-7mPa，沸点为581.3℃。还未用于烟草病害的防治；同时，微生物菌剂可与病原菌竞争营养、空间位点，诱导植物产生抗病性，其次生代谢产物对病原菌具有抑制作用、对植物具有促生作用，且绿色、环保、安全，在植物病害的防治中具有重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的在于克服上述问题而提供的一种对烟草赤星病、烟草白粉病及烟草灰霉病具有较好的防治效果，环境友好的含嘧菌酯的杀菌剂组合物。

本发明的另一目的在于提供该嘧菌酯组合物的制备方法。

本发明的再一目的在于提供该含嘧菌酯的杀菌剂组合物在防治烟草赤星病、烟草白粉病及烟草灰霉病方面的用途。

本发明的一种含嘧菌酯的杀菌剂组合物，其中：含嘧菌酯浓度为20-300μg/ml，解淀粉芽孢杆菌X60的浓度为1×10⁶-1×10¹⁰CFU/ml。

上述的一种含嘧菌酯的杀菌剂组合物，其中：解淀粉芽孢杆菌X60，其形态特征：在NA培养基上培养24小时后产生单菌落，菌落为乳白色，圆形，边缘有细齿，中间隆起，表面光滑，菌体为短直杆状，革兰氏阳性菌，可产生芽孢，可分泌蛋白酶、纤维素酶等。

该菌种已于2013年8月13日保藏在中国典型培养物保藏中心(地址：湖北省武汉市武昌珞珈山，武汉大学)，保藏号：CCTCC M 2013375，名称为：解淀粉芽孢杆菌X60(Bacillus amyloliquefaciens X60)。

(一)解淀粉芽孢杆菌X60(Bacillus amyloliquefaciens)的分离步骤：

采用“稀释分离法”称取10g烟草根围土壤于洁净烧杯中，加于90ml无菌水，磁力搅拌使其充分混匀，静置20分钟后吸取0.5ml上清液于15×150mm洁净试管中，添加4.5ml无菌水充分混匀得10^-1浓度母液，再从稀释后的试管中吸取0.5ml上清液，再加入4.5ml无菌水充分混匀制得10^-2浓度溶液，依次稀释至10^-9不同浓度的土壤溶液待用。分别吸取上述不同浓度土壤溶液100μl，均匀涂布于培养细菌的NA平板上，28℃黑暗培养，待细菌长出后挑取单菌落纯化。

(二)培养基：

牛肉膏蛋白胨固体培养基(NA)：牛肉膏3g，蛋白胨10g，琼脂粉16g，水1000ml，pH 6.8-7.2。

牛肉膏蛋白胨液体培养基(NB)：牛肉膏3g，蛋白胨10g，水1000ml，pH 6.8-7.2。

(三)菌种的保种和传代：