[发明专利]一种磷酸肽固相萃取小柱及制备和应用

权利要求书

1.一种磷酸肽固相萃取小柱的制备方法，其特征在于：

通过离心辅助的方法，将固定钛离子亲和色谱填料填入靠近吸液口处带有筛板的移液器吸头中制备成磷酸肽固相萃取小柱；

所述固定钛离子亲和色谱填料粒径为200 μm；用于作为固相萃取柱管的移液器吸头体积是10 μL-1 mL, 填料装填高度是0.1-2 cm；筛板的材质为多聚四氟乙烯，直径为0.05-10cm，厚度0.1-0.5 cm，孔径5-20 μm，孔隙率5-30%；

固定钛离子亲和色谱填料的制备方法如下：

（1）将0.1-10 g聚乙烯醇分散到10-500 mL去离子水中得到分散介质；

（2）将1-100 mL甲苯，1-100 mL乙二醇二甲基丙烯酸酯，1-100 mL甲基丙烯酸缩水甘油酯和0.1-10 g过氧化苯甲酰混合得到单体相；

（3）将步骤（2）的单体相加入步骤（1）的分散介质中在10-200℃ 下加热并搅拌2-24 h得到高分子微球；

（4）将步骤（3）得到的高分子微球与10-300 mL乙二胺反应得到表面带有氨基的高分子微球；

（5）将步骤（4）得到的表面带有氨基的高分子微球与1-20 mL磷酸反应，随后再与10-300 mM硫酸钛在4-37℃ 下反应2-24 h制备得到固定钛离子亲和色谱填料。

2.根据权利要求1所述的磷酸肽固相萃取小柱的制备方法，其特征在于：

所述移液器吸头为GELoader吸头。

3.根据权利要求1所述的磷酸肽固相萃取小柱的制备方法，其特征在于为：

（1）将直径为0.1-10 mm的筛板填入移液器吸头中，筛板距离吸液口的距离为0.5-1cm；

（2）将枪头卡在直径为0.5-1.5 cm 套管中放入1.5 mL离心管中；

（3）将固定钛离子亲和色谱填料填入枪头中，在10-1000 g的离心力作用下压实得到用于磷酸肽固相萃取的小柱。

4.一种权利要求1所述的制备方法制备的磷酸肽固相萃取小柱的应用，其特征在于：所述小柱用于蛋白质组样品酶解液中磷酸肽的富集，磷酸肽固相萃取基质是固定钛离子亲和色谱填料。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：

将用于蛋白质组样品酶解液中磷酸肽的富集是通过离心辅助完成的，离心力控制在10-1000 g。

6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于：

利用固相萃取小柱对蛋白质组样品酶解液中磷酸肽的富集是通过离心辅助完成的，操作简便，耗时短，并且容易实现磷酸肽与其它非特异性肽段的分离从而实现磷酸肽的高特异性富集。