[发明专利]一种聚核苷酸、转化子及其应用

说明书

本发明涉及一种聚核苷酸，本发明还涉及一种含启动子及λ噬菌体阻遏蛋白CI的操纵位点的聚核苷酸、转化子，本发明还涉及该聚核苷酸、转化子的应用，特别是在发酵生产多肽，尤其是利用发酵生产的多肽产物生产1,5‑戊二胺方面的应用。一种第一聚核苷酸，所述第一聚核苷酸的序列为如SEQ ID NO 1所示的序列，或如SEQ ID NO 1所示序列的碱基互补序列。一种第二聚核苷酸，所述第二聚核苷酸包含一个启动子和如上所述的第一聚核苷酸。一种转化子，所述转化子包含如上所述的第二聚核苷酸。本发明解决了λP_R T‑41C诱导条件下表达效果不好的技术问题，为诱导重组表达提供了新的选择。

技术领域

本发明涉及一种聚核苷酸，还涉及这种聚核苷酸作为λ噬菌体阻遏蛋白CI的操纵位点的应用；本发明还涉及一种含启动子及λ噬菌体阻遏蛋白CI的操纵序列的聚核苷酸、转化子，本发明还涉及该聚核苷酸、转化子的应用，特别是在发酵生产多肽，尤其是利用发酵生产的多肽产物生产1,5-戊二胺方面的应用。

背景技术

在以表达重组蛋白为目的的发酵中，通常使用组成型启动子或诱导型启动子(又称可诱导启动子)来启动重组基因的表达。组成型启动子的表达为持续性表达，无需调控。诱导型启动子又分为阻遏型启动子和激活型启动子，分别受不同的转录因子(又称转录调控蛋白)控制。阻遏型启动子与阻遏蛋白(或称转录抑制蛋白)结合，受到抑制；在诱导条件下，阻遏蛋白与启动子序列解离，解除抑制。对于阻遏型启动子而言，当阻遏蛋白缺失时，可视为处于持续诱导状态，也可当成组成型启动子。例如Plac启动子受阻遏蛋白LacI抑制，是诱导型启动子。但lac启动子在不能表达LacI蛋白的宿主菌中可以组成型表达。激活型启动子在非诱导条件下不能表达或表达效率低；诱导条件下，激活蛋白被激活，并与激活型启动子结合，促使其表达。例如P_BAD启动子受激活蛋白AraC的激活。

原核生物的启动子中有两个关键性元件，-10元件和-35元件，分别位于转录起始点上游约-35和-10碱基位置，是σ因子识别位点。σ因子是原核生物RNA聚合酶全酶(包括RNA聚合酶核心酶和σ因子)中的辅助因子。σ因子促使RNA聚合酶与启动子序列结合，启动转录。

在诱导型启动子的序列中，序列上游，和/或序列下游有转录因子(阻遏蛋白或激活蛋白)的操纵位点。转录因子通过与操纵位点的结合控制启动子。例如λ噬菌体基因组中含有6个λ噬菌体阻遏蛋白CI(简称λCI)的操纵位点：OL1(TATCACCGCCAGTGGTA)，OL2(CAACACCGCCAGAGATA)，OL3(TATCACCGCAGATGGTT)，OR1(TACCTCTGGCGGTGATA)，OR2(TAACACCGTGCGTGTTG)，OR3(TATCACCGCAAGGGATA)。λ噬菌体中受λCI调控的L启动子(简称λP_L)和R启动子(简称λP_R)的-10元件和-35元件都分别与两个λCI操纵位点部分重合，因此λCI与操纵位点的结合会阻碍RNA聚合酶与启动子的结合，抑制转录。λCI与各操纵位点的结合对启动子的活性都有一定的影响。对于λP_R来说，当OR1与OR2协同作用时，所起的抑制作用最大；OR1与OR3协同作用所起的抑制作用次之；而OR2与OR3协同作用或各操纵位点单独作用所起的抑制作用更弱(见Lewis等，“New insights into the phage genentic switch:Effects of bacteriophage lambda operator mutations on DNA looping andregulation of P_R,P_L,and P_RM”，Journal of Molecular Biology(2016)，doi:10.1016/j.jmb.2016.08.027)。