[发明专利]一种益生菌及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种益生菌及其制备方法。

背景技术

益生菌，是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。益生菌对宿主健康起着重要作用，主要包括以下几个方面：一、帮助宿主对营养物质的消化吸收；二、产生维生素、短链脂肪酸及抗氧化剂等重要物质；三、通过抑制有害细菌的生长及清除有害细菌产生的毒素来帮助宿主抵御细菌病毒感染，提升宿主的抵抗力。

目前，人类发现的益生菌大体上可以分为三类：乳酸杆菌、双歧杆菌和革兰氏阳性菌球菌。随着对肠道菌群的了解越来越深入，多数研究表明不同的细菌对不同的疾病人群发挥着不同的作用，提出了需要分离培养出多种化的益生菌这一个市场需求。2004年，由Muriel Derrien等人分离出Akkermansia属第一株细菌Akkermansia muciniphila，研究者对Akkermansia muciniphila的功能研究发现该株细菌具有改善肥胖及Ⅱ型糖尿病患者的代谢情况，具有减肥降血糖的效果。现有技术中，分离得到的Akkermansia属的细菌只有Akkermansia muciniphila这一种，对于该类细菌的分离方法也比较复杂，限制了益生菌的进一步推广应用。

因此，研发出一种益生菌及其制备方法，用于解决现有技术中，益生菌种类单一、分离复杂的技术缺陷，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种益生菌及其制备方法，用于解决现有技术中，益生菌种类单一、分离复杂的技术缺陷。

本发明提供了一种益生菌，所述益生菌的保藏编号为：GDMCC60085。

本发明还提供了一种上述益生菌的制备方法，所述制备方法为：

步骤一、配置菌液：粪便与生理盐水混匀后稀释得稀释液，所述稀释液接种于粘蛋白液体培养基中，培养后得菌液；

步骤二、PCR扩增：以所述菌液为模板，使用针对Akkermansia属的引物进行PCR，挑选PCR反应阳性管中的菌液接种于粘蛋白固体培养基上，培养后得菌落；

步骤三、培养纯化菌落。

优选地，所述稀释液中粪便浓度为10-6g/ml，所述稀释液和所述粘蛋白液体培养基的体积比为1:9。

优选地，步骤一中所述培养的条件为：37℃厌氧培养，步骤一中所述培养的时间为4天。

优选地，所述针对Akkermansia属的引物包括：引物一和引物二；

所述引物一的序列为CAGCACGTGAAGGTGGGGAC，所述引物二的序列为CCTTGCGGTTGGCTTCAGAT。

优选地，步骤二中所述培养的条件为：37℃厌氧培养，步骤一中所述培养的时间为4天。

优选地，所述培养纯化菌落得方法为：所述菌落接种于巧克力平板上培养后，将巧克力平板上的菌落接种于哥伦比亚血平板上进行纯化培养出菌落

优选地，所述制备方法还包括：测序验证，所述测序验证方法在所述培养纯化菌落步骤后进行。

本发明还提供了一种益生菌固态曲，所述益生菌固态曲由上述益生菌制得。

优选地，所述益生菌固态曲中，所述益生菌的活菌数量为10⁹cfu/g曲。

综上所述，本发明提供了一种益生菌，所述益生菌的保藏编号为：GDMCC60085。本发明还提供了一种上述益生菌的制备方法，所述制备方法为：步骤一、配置菌液；步骤二、PCR扩增：步骤三、培养纯化菌落。本发明还提供了一种益生菌固态曲，所述益生菌固态曲由上述益生菌制得。本发明提供的技术方案中，经全基因测序实验，所制得的菌种可参与碳水化合物代谢以及脂肪代谢，同时还可以产生维生素和短链脂肪酸乙酸，是一种具有良好潜力的益生菌。同时，本发明提供的制备方法简单易操作，适合大规模推广应用。解决了现有技术中，益生菌种类单一、分离复杂的技术缺陷。

生物保藏说明

Norzea，分类命名：Akkermansia sp.，于2016年10月11日保藏在广东省微生物菌种保藏中心，地址为广州市先烈中路100号大院59号5楼，保藏编号为GDMCC No.60085。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。