[发明专利]多表位测定

说明书

本发明涉及一种在亲和力测定中检测生物学靶标的方法，所述方法包括以下步骤：提供包含所述生物学靶标的生物学样品体积；将第一捕获部分加入包含所述生物学靶标的生物学样品体积，其中所述第一捕获部分粘附至颗粒；将捕获的生物学靶标浓缩为小于步骤a)中的生物学样品体积的洗脱体积；从所述颗粒切割所述第一捕获部分或所述生物学靶标以及以夹心或竞争性亲和力测定形式直接或间接检测和/或定量所述生物学靶标，其中所述生物学靶标与至少一种捕获部分结合，优选与至少两种捕获部分结合。

本申请是2011年6月14日提交的题为“多表位测定的中国专利申请201180029393.3的分案申请。

技术领域

本发明涉及亲和力测定的领域。具体地，本发明涉及一种在亲和力测定中检测生物学靶标的方法以及生物学靶标的检测组件。

背景技术

亲和力测定是测量溶液中的物质，分析物的存在或浓度的生物化学测试，所述溶液通常包含物质的复杂混合物，例如生物学液体，如血液、唾液、血清或尿。这样的测定基于给定分子或所述分子的特定部分如抗体以高特异性结合至一种或非常有限组的其他分子的能力。测定的特异性取决于分析物能够结合至其特异性结合伙伴以排除待分析的样品中的所有其他物质的程度。

除了需要特异性，必须选择对分析物具有足够高亲和力的结合伙伴以产生准确和可重复的测量，即可测量信号。在历史上，这通过测量一些物理特征如光散射的变化或折射率的变化来完成。通过现代仪器，这类方法再次越来越受欢迎。然而，现在的大多数免疫测定依赖于使用分析试剂以结合至分析物，所述分析试剂与可检测的标记结合(associate)。已证实各种标记，包括用于放射免疫测定的放射性元素；酶；荧光、磷光和化学发光染料；乳胶和磁性颗粒；染料微晶、金、银和硒胶体颗粒；金属螯合物；辅酶；电活性基团；寡核苷酸、稳定的自由基、聚合物等。这类标记用于分离游离和结合的标记试剂之后检测和定量结合事件，或者通过以结合事件影响标记产生的信号的变化这样的方式设计系统来检测和定量结合事件。

亲和力测定通常探测肽、蛋白、寡核苷酸、寡糖或小分子如适配体与固定的结合伙伴的相互作用。典型的结合伙伴包括蛋白，其可以为受体、酶或抗体，但是还包括多肽和多氨基酸(例如，镍结合位点的多His标签、酰胺或Schiff碱连接的多赖氨酸、硫醚连接的多半胱氨酸)。例如，基于固定方案的链霉亲和素广泛用于将生物素化的生物学元素连接至测定表面。

例如，亲和力测定可以进一步分类为竞争性和非竞争性测定。在竞争性亲和力测定中，生物学样品中的分析物与标记的分析物类似物竞争结合其伙伴。然后测量结合至伙伴的标记的分析物类似物的量。在这种方法中，反应信号与生物学样品中分析物的浓度成反比。这是因为反应信号越大，样品中越少分析物可用于与标记的分析物类似物竞争。

在非竞争性亲和力测定中，其也称为“夹心测定”，生物学样品中的分析物结合至其伙伴，然后标记试剂结合至所述分析物。然后测量位点上标记试剂的量。不像竞争性方法，非竞争性方法即夹心测定的结果直接与生物学样品中分析物的浓度成比例。这是因为如果生物学样品中不存在分析物，则标记试剂不会结合。

亲和力测定，特别是免疫测定广泛用作细菌、病毒、内分泌和寄生疾病的诊断工具以及滥用和慢性疾病状态的检测药物，一个实例是可以导致心脏病发作的心脏疾病。

各种技术如放射免疫测定、免疫过氧化物酶和ELISA目前用于亲和力测定，特别是免疫测定。然而，放射免疫测定具有需要使用危险和破坏环境的试剂的缺点。

此外，除了特异性，如上文所述，灵敏度对于测定性能是至关重要的。测定的灵敏度可以通过结合事件产生的特异性信号与系统的背景噪声相比的比例来定义。

降低信噪比(SNR)的因素包括试剂如抗体非特异性结合至测定的各种组分。此外，与测定的试剂如酶底物反应的测定基质的一些内源性组分的活性倾向于产生“假”反应产物，其干扰标记的复合物如标记的抗体-抗原复合物形成的“真正”产物的准确检测。