[发明专利]一种用于筛选弱MdmX抑制剂或测试弱MdmX抑制剂的抑制活性的融合蛋白

权利要求书

1.一种用于筛选弱MdmX抑制剂或测试弱MdmX抑制剂的抑制活性的融合蛋白，所述融合蛋白包括测试序列、结合序列和连接臂序列；

所述测试序列为MdmX序列或包含MdmX序列中的p53结合结构域的MdmX片段；

所述结合序列为保持与MdmX有结合活性的包含p53序列中的MdmX结合结构域的p53片段的突变体；

所述连接臂序列为一个肽段，所述连接臂的上下游分别与所述测试序列和所述结合序列之一连接；所述连接臂的氨基酸序列不参与所述融合蛋白的二级结构的形成或维持；所述连接臂的长度和柔性足以使所述测试序列的空间结构的任一表面部分与所述结合序列的空间结构的任一表面部分在空间上有机会相接触；

该融合蛋白用式p53p^F19A-XX-N-MdmX或p53p^L26A-XX-N-MdmX表示，其特征在于，

p53p^F19A或p53p^L26A代表所述结合序列，p53p^F19A具体为：SQETASDLWKLLPEN，p53p^L26A具体为：SQETFSDLWKLAPEN；

XX代表所述连接臂序列SEQ ID NO.2，具体为：GSGSSENLYFQ；

N-MdmX代表所述测试序列SEQ ID NO.3，具体为：GSQINQVRPKLPLLKILHAAGAQGEMFTVKEVMHYLGQYIMVKQLYDQQEQHMVYCGGDLLGELLGRQSFSVKDPSPLYDMLRKNLVTLAT。

2.如权利要求1所述的用于筛选弱MdmX抑制剂或测试弱MdmX抑制剂的抑制活性的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的上游或下游具有用于蛋白分离和/或纯化的标签序列。

3.一种用于筛选弱MdmX抑制剂或测试弱MdmX抑制剂的抑制活性的融合蛋白的表达载体，其特征在于，所述表达载体能够借助宿主表达如权利要求1或2所述的用于筛选弱MdmX抑制剂或测试弱Mdmx抑制剂的抑制活性的融合蛋白。

4.如权利要求3所述的用于筛选弱MdmX抑制剂或测试弱MdmX抑制剂的抑制活性的融合蛋白的表达载体，其特征在于，所述载体是pET-28a载体，所述宿主是大肠杆菌BL21(DE3)。

5.如权利要求1或2所述的用于筛选弱MdmX抑制剂或测试弱MdmX抑制剂的抑制活性的融合蛋白在筛选弱MdmX抑制剂或测试弱MdmX抑制剂的抑制活性的用途，其特征在于，所述弱MdmX抑制剂是能够与p53竞争性结合MdmX的抑制剂。