[发明专利]检测马杜霉素的时间分辨荧光免疫试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测马杜霉素的时间荧光分辨荧光免疫分析试剂盒。所述检测马杜霉素的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒是由多孔包被板、缓冲液、马杜霉素标准品、马杜霉素的抗体冻干品、铕标记的羊抗鼠抗体、洗涤液和增强液所组成。所述检测马杜霉素的时间荧光免疫分析试剂盒的检测方法包括下列步骤：(1)免疫原的制备；(2)包被原的制备；(3)单克隆抗体的制备；(4)样品的前处理及检测。本发明检测时间短、平均回收率高、样品前处理简单、能现场操作检测，应用广泛，检测成本低，同时具有检测特异性强，批内和批间差异小、灵敏度高和操作简单快速，且特别适合于大批量样品的检测等优点。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体的说，涉及一种检测马杜霉素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

背景技术

马杜霉素 英文名称Maduramicin,又名马度米星.是一种较新型的聚醚类一价单糖苷离子载体抗生素，本品抗球虫谱广对子孢子和第一代裂殖体均有抗球虫活性。本品能有效控制6种常见的鸡球虫，对鸭球虫病也有良好的预防效果。混饲，每1000 kg饲料5～10g马杜霉素由美国氰胺公司于20世纪80年代开发，1992年我国开发成功并大批量生产，由于价格较低，对球虫病具有良好的预防和治疗作用，使马杜霉素在临床得到广泛的应用。但该药毒性较大，安全范围窄，使用剂量非常接近鸡的中毒量，超量使用易引起禽中毒。家禽马杜霉素中毒一般为急性过程。急性死亡（1～ 2 d 内死亡）的动物一般会出现典型的中毒症状：东走西窜、站立不安、兴奋亢进等神经症状，或水样腹泻、腿软、行走及站立不稳。严重者两腿麻痹，昏睡直至死亡。亚慢性中毒表现为减食甚至食欲废绝，迅速消瘦，粪便呈现色泽变化，从青灰、浅绿、绿色至胆绿色，出现率约 20% 左右。家禽精神不振、蹲伏驱赶不动，甚至两脚瘫痪、驱赶时跗关节着地，两翅拍动、无力站立，甚至死亡。 在临床应用时常因使用不当，造成家禽中毒，经济损失较大。Ft%HWGE

而时间分辨荧光免疫分析法（TR-FIA）由于其特异性强、灵敏度高、操作简单、廉价，且特别适于大批量样品的检测等优点而越来越被人们所重视和采用。目前还没有针对马杜霉素检测的时间荧光免疫分析法的专利和文献报道。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种蔬菜水果中马杜霉素残留的检测时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

本发明的目的之二在于提供一种快速简便地检测蔬菜水果中马杜霉素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，用于定量或定性地检测农作物中马杜霉素残留量。

本发明目的之一是这样实现的：检测马杜霉素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其关键在于由多孔包被板、缓冲液、马杜霉素标准品溶液、抗马杜霉素的抗体冻干品、铕标记的兔抗鼠抗体、洗涤液和增强液体所组成。

本发明目的之二是这样实现的：检测马杜霉素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，包括免疫原、包被原和单克隆抗体的制备以及样品前处理及检测，其关键在于：

(1) 免疫原的制备：将半抗原马杜霉素与牛血清白蛋白（BSA）偶联，得到免疫原（马杜霉素-BSA）；

(2) 包被原的制备：将半抗原马杜霉素与卵血清白蛋白（OVA）偶联，得到包被原（马杜霉素-OVA）；

(3) 单克隆抗体的制备：

a. 用步骤(1)的免疫原（马杜霉素-BSA）免疫小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗马杜霉素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

b. 以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用Protein G柱进行纯化，获得抗马杜霉素的单克隆抗体IgG；

c. 用步骤(2)的包被原包被96孔包被板；

(4) 样品的前处理及检测：